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HeLa細(xì)胞傳代后90% 死亡，求解
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本人菜鳥，才開始學(xué)養(yǎng)細(xì)胞。 替別人傳 細(xì)胞，結(jié)果HeLa細(xì)胞狀態(tài)好，長(zhǎng)的太快，本是第二天下午傳的，結(jié)果沒時(shí)間，第三天中午傳的。因?yàn)榧?xì)胞長(zhǎng)的很滿，不過也有很多死細(xì)胞，就一個(gè)大瓶傳了一個(gè)中瓶，兩個(gè)大瓶。鏡檢，三個(gè)瓶子中細(xì)胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗(yàn)，長(zhǎng)一天絕對(duì)很滿。結(jié)果第四天早上，也就是今天早晨看的時(shí)候，90%的細(xì)胞飄起來了，只有10%細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的，初步認(rèn)為可能是新配置的培養(yǎng)基沒有混合均勻，因?yàn)槲壹尤隖BS和雙抗之后，只是左右晃動(dòng)幾下培養(yǎng)基，10min之后開始用這個(gè)培養(yǎng)基（配置培養(yǎng)基后才開始消化細(xì)胞），不知道是不是這個(gè)原因。 雙抗是找別人借的，人家說濃度是100 X 的。DMEM是新的，F(xiàn)BS是用過的，冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細(xì)胞，培養(yǎng)基是以前的，昨天看還是可以的，死細(xì)胞不多，只是貼壁細(xì)胞不多，但是今天早上看的時(shí)候，也是很多死細(xì)胞，狀態(tài)不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染導(dǎo)致這些細(xì)胞離我而去？求大俠們解答。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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Hela細(xì)胞，長(zhǎng)得快，但是非常矯情的一個(gè)細(xì)胞系。別的細(xì)胞系不換培養(yǎng)液都是一個(gè)個(gè)的死，及時(shí)補(bǔ)換培養(yǎng)液還是有救的。Hela細(xì)胞要死那就是商量好了，一瓶一瓶的死，一個(gè)不拉的去見馬克思。 高糖培養(yǎng)液基本不會(huì)餓死細(xì)胞系，除了變成非常黃的時(shí)候。 覺得可能還是消化、重懸的哪一個(gè)步驟出了問題。 采用含EDTA的胰酶消化效果會(huì)好很多，海拉細(xì)胞消化的話基本是一粒一粒的，不像其他的細(xì)胞會(huì)一團(tuán)一團(tuán)的下來（但是一團(tuán)一團(tuán)消化下來的細(xì)胞貼壁、生長(zhǎng)的可能會(huì)更快）。 Hela細(xì)胞個(gè)人覺得不適合新手練手的，因?yàn)檫@細(xì)胞非常矯情。很容易一個(gè)不留的死光光。覺得hela細(xì)胞優(yōu)勢(shì)就是長(zhǎng)得快，缺點(diǎn)就是非常容易死光光（別的細(xì)胞系都是一個(gè)一個(gè)的死，這貨真是一瓶一瓶的死）。 養(yǎng)細(xì)胞不要怕，多練幾次就好，Hela細(xì)胞養(yǎng)死了就不要花心思拯救，直接換一批新的Hela細(xì)胞就好 |
8樓2013-09-30 22:37:27
arystal
金蟲 (小有名氣)
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2樓2013-09-29 13:46:27
3樓2013-09-29 16:22:30
夢(mèng)幻未碎
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-29 20:25:27
gyesang: 回帖置頂 2013-09-29 20:25:32
挫人小魚: 金幣+3 2013-10-07 17:46:48
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挫人小魚: 金幣+3 2013-10-07 17:46:48
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親！細(xì)胞消化只要肉眼可見培養(yǎng)瓶底部細(xì)胞脫落就可以加培養(yǎng)基進(jìn)行輕柔吹打，一般消化在1~2min，具體以觀察為準(zhǔn)。消化8分鐘居然還能有10％活細(xì)胞真的是奇跡了。。。。 培養(yǎng)液里面有沒有臟臟的感覺？ |
4樓2013-09-29 17:01:58
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