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HeLa細(xì)胞傳代后90% 死亡，求解
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本人菜鳥，才開始學(xué)養(yǎng)細(xì)胞。 替別人傳 細(xì)胞，結(jié)果HeLa細(xì)胞狀態(tài)好，長的太快，本是第二天下午傳的，結(jié)果沒時間，第三天中午傳的。因為細(xì)胞長的很滿，不過也有很多死細(xì)胞，就一個大瓶傳了一個中瓶，兩個大瓶。鏡檢，三個瓶子中細(xì)胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗，長一天絕對很滿。結(jié)果第四天早上，也就是今天早晨看的時候，90%的細(xì)胞飄起來了，只有10%細(xì)胞貼壁生長，而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的，初步認(rèn)為可能是新配置的培養(yǎng)基沒有混合均勻，因為我加入FBS和雙抗之后，只是左右晃動幾下培養(yǎng)基，10min之后開始用這個培養(yǎng)基（配置培養(yǎng)基后才開始消化細(xì)胞），不知道是不是這個原因。 雙抗是找別人借的，人家說濃度是100 X 的。DMEM是新的，F(xiàn)BS是用過的，冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細(xì)胞，培養(yǎng)基是以前的，昨天看還是可以的，死細(xì)胞不多，只是貼壁細(xì)胞不多，但是今天早上看的時候，也是很多死細(xì)胞，狀態(tài)不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染導(dǎo)致這些細(xì)胞離我而去？求大俠們解答。 |
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親！細(xì)胞消化只要肉眼可見培養(yǎng)瓶底部細(xì)胞脫落就可以加培養(yǎng)基進(jìn)行輕柔吹打，一般消化在1~2min，具體以觀察為準(zhǔn)。消化8分鐘居然還能有10％活細(xì)胞真的是奇跡了。。。。 培養(yǎng)液里面有沒有臟臟的感覺？ |
4樓2013-09-29 17:01:58
超然渡陳
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| 傳代后狀態(tài)不好或者死的一般就四個原因：1.接觸細(xì)胞的液體溫度過低2.胰酶濃度過高或者消化時間過長3.吹打分散時力度過大或吹打時間過長4.細(xì)胞污染。你的DMEM培養(yǎng)基從4℃冰箱拿出來之后有沒有經(jīng)過溫箱復(fù)溫？一般在換液或者傳達(dá)之前要把培養(yǎng)基、PBS、胰酶放進(jìn)37℃溫箱復(fù)溫30min左右。細(xì)胞狀態(tài)本來很好的話接觸涼的培養(yǎng)基一般都會變的很差，狀態(tài)不好的細(xì)胞接觸涼的培養(yǎng)基一般都會掛掉。由于沒說你胰酶使用濃度，所以不好判斷是不是消化過頭，或者吹打分散細(xì)胞時太大力。細(xì)胞污染很容易判斷，傳代后培養(yǎng)基變渾濁，或者顏色變黃或者鏡檢能看到很多小黑點就是污染了。 |
6樓2013-09-30 14:09:30
arystal
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3樓2013-09-29 16:22:30
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7樓2013-09-30 19:00:27
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Hela細(xì)胞，長得快，但是非常矯情的一個細(xì)胞系。別的細(xì)胞系不換培養(yǎng)液都是一個個的死，及時補換培養(yǎng)液還是有救的。Hela細(xì)胞要死那就是商量好了，一瓶一瓶的死，一個不拉的去見馬克思。 高糖培養(yǎng)液基本不會餓死細(xì)胞系，除了變成非常黃的時候。 覺得可能還是消化、重懸的哪一個步驟出了問題。 采用含EDTA的胰酶消化效果會好很多，海拉細(xì)胞消化的話基本是一粒一粒的，不像其他的細(xì)胞會一團(tuán)一團(tuán)的下來（但是一團(tuán)一團(tuán)消化下來的細(xì)胞貼壁、生長的可能會更快）。 Hela細(xì)胞個人覺得不適合新手練手的，因為這細(xì)胞非常矯情。很容易一個不留的死光光。覺得hela細(xì)胞優(yōu)勢就是長得快，缺點就是非常容易死光光（別的細(xì)胞系都是一個一個的死，這貨真是一瓶一瓶的死）。 養(yǎng)細(xì)胞不要怕，多練幾次就好，Hela細(xì)胞養(yǎng)死了就不要花心思拯救，直接換一批新的Hela細(xì)胞就好 |
8樓2013-09-30 22:37:27
超然渡陳
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9樓2013-10-01 22:51:43
10樓2013-10-07 15:00:15
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