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HeLa細(xì)胞傳代后90% 死亡，求解
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本人菜鳥(niǎo)，才開(kāi)始學(xué)養(yǎng)細(xì)胞。 替別人傳 細(xì)胞，結(jié)果HeLa細(xì)胞狀態(tài)好，長(zhǎng)的太快，本是第二天下午傳的，結(jié)果沒(méi)時(shí)間，第三天中午傳的。因?yàn)榧?xì)胞長(zhǎng)的很滿，不過(guò)也有很多死細(xì)胞，就一個(gè)大瓶傳了一個(gè)中瓶，兩個(gè)大瓶。鏡檢，三個(gè)瓶子中細(xì)胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗(yàn)，長(zhǎng)一天絕對(duì)很滿。結(jié)果第四天早上，也就是今天早晨看的時(shí)候，90%的細(xì)胞飄起來(lái)了，只有10%細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的，初步認(rèn)為可能是新配置的培養(yǎng)基沒(méi)有混合均勻，因?yàn)槲壹尤隖BS和雙抗之后，只是左右晃動(dòng)幾下培養(yǎng)基，10min之后開(kāi)始用這個(gè)培養(yǎng)基（配置培養(yǎng)基后才開(kāi)始消化細(xì)胞），不知道是不是這個(gè)原因。 雙抗是找別人借的，人家說(shuō)濃度是100 X 的。DMEM是新的，F(xiàn)BS是用過(guò)的，冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細(xì)胞，培養(yǎng)基是以前的，昨天看還是可以的，死細(xì)胞不多，只是貼壁細(xì)胞不多，但是今天早上看的時(shí)候，也是很多死細(xì)胞，狀態(tài)不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染導(dǎo)致這些細(xì)胞離我而去？求大俠們解答。 |
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| 傳代后狀態(tài)不好或者死的一般就四個(gè)原因：1.接觸細(xì)胞的液體溫度過(guò)低2.胰酶濃度過(guò)高或者消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)3.吹打分散時(shí)力度過(guò)大或吹打時(shí)間過(guò)長(zhǎng)4.細(xì)胞污染。你的DMEM培養(yǎng)基從4℃冰箱拿出來(lái)之后有沒(méi)有經(jīng)過(guò)溫箱復(fù)溫？一般在換液或者傳達(dá)之前要把培養(yǎng)基、PBS、胰酶放進(jìn)37℃溫箱復(fù)溫30min左右。細(xì)胞狀態(tài)本來(lái)很好的話接觸涼的培養(yǎng)基一般都會(huì)變的很差，狀態(tài)不好的細(xì)胞接觸涼的培養(yǎng)基一般都會(huì)掛掉。由于沒(méi)說(shuō)你胰酶使用濃度，所以不好判斷是不是消化過(guò)頭，或者吹打分散細(xì)胞時(shí)太大力。細(xì)胞污染很容易判斷，傳代后培養(yǎng)基變渾濁，或者顏色變黃或者鏡檢能看到很多小黑點(diǎn)就是污染了。 |
6樓2013-09-30 14:09:30
arystal
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親！細(xì)胞消化只要肉眼可見(jiàn)培養(yǎng)瓶底部細(xì)胞脫落就可以加培養(yǎng)基進(jìn)行輕柔吹打，一般消化在1~2min，具體以觀察為準(zhǔn)。消化8分鐘居然還能有10％活細(xì)胞真的是奇跡了。。。。 培養(yǎng)液里面有沒(méi)有臟臟的感覺(jué)？ |
4樓2013-09-29 17:01:58
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