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微生物代謝組在LC-MS上信號(hào)很少,不知道為什么。
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| 做微生物的代謝組學(xué),采用甲醇:水(70:30)于負(fù)20度的條件下提取代謝組,并輔助以負(fù)80度30分鐘,冰上4分鐘,混勻,這樣的三個(gè)循環(huán)促進(jìn)細(xì)胞破裂。離心得到上清液后在真空濃縮里旋干,樣品重構(gòu)于水中,進(jìn)樣LC-MS,掃描范圍50-1000,但沒有什么信號(hào),代謝組不是應(yīng)該得到的譜圖有很多峰的么?是不是旋干的過(guò)程這些小分子都揮發(fā)了呢,求解釋啊。 |
金蟲 (小有名氣)
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首先,旋干的過(guò)程這些小分子應(yīng)該不會(huì)揮發(fā),可能以下因素會(huì)影響你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、你的分析方法設(shè)置不合適,色譜柱、流動(dòng)相梯度,質(zhì)譜條件等; 2、提取條件可能不合適: 1)你用甲醇:水(70:30)提取,最后卻是用水復(fù)溶,這個(gè)極性相差有點(diǎn)太大; 2)提取溫度:負(fù)20度條件下,提取代謝物,溶解性應(yīng)該不好 |
金蟲 (小有名氣)
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我不做微生物的,隨便聊聊,不一定準(zhǔn)確: 1、看下你的流動(dòng)相梯度,是不是初始流動(dòng)相太強(qiáng),導(dǎo)致峰全在死時(shí)間出來(lái)了; 2、細(xì)胞破碎和酶的去活當(dāng)然是在低溫下操作,但是代謝物提取是不是可以溫度稍高一點(diǎn)(如0度),水相比例高一點(diǎn)? 3、甲醇:水(70:30)提取溶劑對(duì)強(qiáng)極性的代謝物溶解性應(yīng)該不是很好 4、細(xì)胞個(gè)數(shù)太少,復(fù)溶體積太大,進(jìn)樣體積太小,這些因素可能都會(huì)導(dǎo)致你最終什么峰。建議微生物用量加大點(diǎn)先試試。 5、試試其他細(xì)胞破碎的代謝物提取方法:如研磨、超聲破碎等。 |
金蟲 (小有名氣)
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