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微生物代謝組在LC-MS上信號很少，不知道為什么。
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| 做微生物的代謝組學(xué)，采用甲醇：水（70:30）于負(fù)20度的條件下提取代謝組，并輔助以負(fù)80度30分鐘，冰上4分鐘，混勻，這樣的三個循環(huán)促進(jìn)細(xì)胞破裂。離心得到上清液后在真空濃縮里旋干，樣品重構(gòu)于水中，進(jìn)樣LC-MS，掃描范圍50-1000，但沒有什么信號，代謝組不是應(yīng)該得到的譜圖有很多峰的么？是不是旋干的過程這些小分子都揮發(fā)了呢，求解釋啊。 |
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agilent
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依兒詠迥: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-10-09 11:04:12
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首先，旋干的過程這些小分子應(yīng)該不會揮發(fā)，可能以下因素會影響你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、你的分析方法設(shè)置不合適，色譜柱、流動相梯度，質(zhì)譜條件等； 2、提取條件可能不合適： 1）你用甲醇：水（70:30）提取，最后卻是用水復(fù)溶，這個極性相差有點(diǎn)太大； 2）提取溫度：負(fù)20度條件下，提取代謝物，溶解性應(yīng)該不好 |
2樓2013-10-08 17:09:41
3樓2013-10-09 11:13:32
agilent
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依兒詠迥: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-10-10 19:09:29
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我不做微生物的，隨便聊聊，不一定準(zhǔn)確： 1、看下你的流動相梯度，是不是初始流動相太強(qiáng)，導(dǎo)致峰全在死時間出來了； 2、細(xì)胞破碎和酶的去活當(dāng)然是在低溫下操作，但是代謝物提取是不是可以溫度稍高一點(diǎn)（如0度），水相比例高一點(diǎn)？ 3、甲醇：水（70:30）提取溶劑對強(qiáng)極性的代謝物溶解性應(yīng)該不是很好 4、細(xì)胞個數(shù)太少，復(fù)溶體積太大，進(jìn)樣體積太小，這些因素可能都會導(dǎo)致你最終什么峰。建議微生物用量加大點(diǎn)先試試。 5、試試其他細(xì)胞破碎的代謝物提取方法：如研磨、超聲破碎等。 |
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依兒詠迥4樓2013-10-10 10:07:22
5樓2013-10-10 19:19:56
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7樓2014-02-18 11:27:12
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