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WB一抗二抗洗脫液洗脫后蛋白有耗損的問題怎么解決？
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| 最近做磷酸化的蛋白，測完磷酸化后要測總蛋白。用一抗二抗洗后，覺得蛋白有耗損。之前按照說明書做過一次，發(fā)現(xiàn)耗損比較明顯。這次已經(jīng)降低一半的一抗二抗洗脫時(shí)間。但是還是有耗損。想問問各位，做磷酸化后總蛋白都是怎么做到？如果保證總蛋白的量和之前相差不大呢？我把內(nèi)參同時(shí)洗脫了孵的抗體，這樣用磷酸化與內(nèi)參的比值：總蛋白和洗脫后內(nèi)參的比值可以嗎？總蛋白的體積比磷酸化小，我用與內(nèi)參的比消除這種誤差可信嗎？謝謝！ |
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2樓2013-10-06 21:05:33
3樓2013-10-08 21:23:01
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因?yàn)槟闼^的比較都是相對的，你的磷酸化抗體或者總蛋白抗體的結(jié)合能力肯定是不同的。這就是為什么有的磷酸化的條帶比總蛋白的還要強(qiáng)。所以你洗脫損失蛋白不會對你的比較有太大的影響。當(dāng)然前提是你洗脫的比較均勻，不會有的地方洗脫掉了有的地方?jīng)]有洗脫掉。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
herjasmine4樓2013-10-08 21:45:48
5樓2013-10-08 22:12:04
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