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ashap新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒酶切驗(yàn)證沒(méi)有目的條帶
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在構(gòu)建慢病毒表達(dá)載體時(shí)，搖完菌提質(zhì)粒酶切。在進(jìn)行第二次酶切后，插入的目的條帶電泳沒(méi)有顯示。這是為什么呢 本人構(gòu)建完后提質(zhì)粒先進(jìn)行PCR驗(yàn)證過(guò)，擴(kuò)增出了目的條帶大小的片段，在第一步酶切時(shí)，電泳顯示條帶大小在10,000bp附近（我的載體為7.8kb, insert 為2250p）。后來(lái)分別用兩個(gè)酶酶切后，大小也對(duì)。 我該如何解決第二部酶切的問(wèn)題。 個(gè)人設(shè)想的是： 分別酶切+單酶切酶切產(chǎn)物PCR+重組質(zhì)粒PCR+兩步酶切后產(chǎn)物PCR=質(zhì)粒構(gòu)建成功。 不知可以不 |
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blackrose8089
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bioxixi
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