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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 酵母平板
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靜安jingan鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
酵母平板
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| 剛做了轉(zhuǎn)化，用的是畢赤酵母，涂板后3天長出來的菌落so奇怪，以至于我就不淡定了，平板是倒置的，結(jié)果菌落是細絲狀的垂直于平板生長，也是白色的，當然平板上也有那種很保守形態(tài)的酵母菌落，目前就是想知道這種到底是不是酵母，這個平板上的單克隆能不能用呢 |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-10-08 16:00:24
靜安jingan: 金幣+8 2013-10-09 09:32:32
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靜安jingan: 金幣+8 2013-10-09 09:32:32
| 個人認為，首先應該確認平板上其他單克隆菌落的形態(tài)是否為酵母的典型形態(tài)（如菌落飽滿、圓潤、乳白色），是否有酵母特有的氣味。確認確實如此之后，建議樓主進行高拷貝篩選，并進行PCR鑒定，這樣就確保篩選到陽性轉(zhuǎn)化子，而且如能篩選到高拷貝轉(zhuǎn)化子在理論上能顯著提高表達量，對后續(xù)的表達純化非常有利。 |
2樓2013-10-08 14:48:02
靜安jingan
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2013-10-08 14:54:12
4樓2013-10-08 17:57:20
cuicchao
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5樓2013-10-08 22:30:00
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
靜安jingan: 金幣+7, ★★★很有幫助 2013-10-09 09:33:24
靜安jingan: 金幣+7, ★★★很有幫助 2013-10-09 09:33:24
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高拷貝篩選就是利用抗生素進行梯度篩選。pPIC3.5K/pPIC9K等載體用G418梯度平板篩選，pPICZα系列的載體用博來霉素（Zeocin）篩選，根據(jù)樓主的描述所用抗生素會見光分解，那么猜測樓主所用的抗生素應該是Zeocin。方法是先將所有的轉(zhuǎn)化子在96孔板上連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)三次，每次培養(yǎng)1-2天，使菌體濃度漸趨一致，在分別點接于不同抗生素濃度的平板上（取1ul），濃度梯度可以設置為：0,0.25,0.5,1.0,2.0mg/ml。然后挑選在最高抗生素濃度平板上生長的菌落，培養(yǎng)后提取基因組利用AOX1通用引物或AOX1 3‘下游引物和α-factor組合引物或者是用目的基因特異性引物鑒定篩選到的轉(zhuǎn)化子。 |
6樓2013-10-09 08:24:40
靜安jingan
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7樓2013-10-09 09:32:16
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