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靜安jingan鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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[求助]
酵母平板
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| 剛做了轉(zhuǎn)化，用的是畢赤酵母，涂板后3天長(zhǎng)出來(lái)的菌落so奇怪，以至于我就不淡定了，平板是倒置的，結(jié)果菌落是細(xì)絲狀的垂直于平板生長(zhǎng)，也是白色的，當(dāng)然平板上也有那種很保守形態(tài)的酵母菌落，目前就是想知道這種到底是不是酵母，這個(gè)平板上的單克隆能不能用呢 |
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靜安jingan
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7樓2013-10-09 09:32:16
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-10-08 16:00:24
靜安jingan: 金幣+8 2013-10-09 09:32:32
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靜安jingan: 金幣+8 2013-10-09 09:32:32
| 個(gè)人認(rèn)為，首先應(yīng)該確認(rèn)平板上其他單克隆菌落的形態(tài)是否為酵母的典型形態(tài)（如菌落飽滿(mǎn)、圓潤(rùn)、乳白色），是否有酵母特有的氣味。確認(rèn)確實(shí)如此之后，建議樓主進(jìn)行高拷貝篩選，并進(jìn)行PCR鑒定，這樣就確保篩選到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，而且如能篩選到高拷貝轉(zhuǎn)化子在理論上能顯著提高表達(dá)量，對(duì)后續(xù)的表達(dá)純化非常有利。 |
2樓2013-10-08 14:48:02
靜安jingan
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怎么搞拷貝篩選啊，第一次聽(tīng)說(shuō)。 我剛剛才想到一種可能性，我的抗生素會(huì)見(jiàn)光失效，所以是涂板的時(shí)候提前涂上去的，先涂抗生素，再涂轉(zhuǎn)化后的菌液，在涂的時(shí)候可能會(huì)某種原因，使菌液在抗生素下層，所以可以生長(zhǎng)，到抗生素那層的時(shí)候由于沒(méi)有抗性，外圍的就沒(méi)有長(zhǎng)起來(lái)，但是內(nèi)部沒(méi)有直接接觸抗生素，所以可以生長(zhǎng)，所以就形成了這種古怪的形態(tài)。估計(jì)假陽(yáng)性的可能大。 早上涂片看了一下，都是酵母菌，唯一的區(qū)別就是普通菌落大部分處于生長(zhǎng)期，分裂的很少；而菌落形狀奇怪的則大部分處于分裂期 |
3樓2013-10-08 14:54:12
ndsc
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4樓2013-10-08 17:57:20
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