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yini4632鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化的問(wèn)題，求高手解答��！
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實(shí)驗(yàn)室以前用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的雙元載體，用于構(gòu)建突變體庫(kù)的，含有GFP+潮霉素基因，我想用來(lái)檢測(cè)下自己建立的PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化體系，不知道到可以不？對(duì)于原生質(zhì)體介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化總是弄不清楚，質(zhì)粒進(jìn)入原生質(zhì)體后，是不是整個(gè)質(zhì)粒隨機(jī)插入到基因組中。農(nóng)桿菌中有vir基因，可以切除T-DNA然后隨機(jī)插入，原生質(zhì)體中質(zhì)粒整合到基因組中是怎么整合上去的，跟農(nóng)桿菌介導(dǎo)區(qū)別在哪里？迷糊中。。。。。還有用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因敲除質(zhì)粒，含有同源臂的質(zhì)粒，農(nóng)桿菌介導(dǎo)后有同源重組和隨機(jī)插入2種轉(zhuǎn)化子，那這種質(zhì)粒用原生質(zhì)體介導(dǎo)是不是也會(huì)出現(xiàn)同源重組和隨機(jī)插入的轉(zhuǎn)化子？ [ Last edited by yini4632 on 2013-10-8 at 20:03 ] |
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yini4632
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2樓2013-10-09 15:00:34
zgb1982
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3樓2013-10-09 21:18:17
【答案】應(yīng)助回帖
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| 印象是農(nóng)桿菌在乙酰丁香酮誘導(dǎo)下，侵染，通過(guò)Ti/Ci上的一個(gè)蛋白與原生質(zhì)體細(xì)胞形成通道，把T-DNA區(qū)DNA通過(guò)通道轉(zhuǎn)入原生質(zhì)體細(xì)胞，DNA轉(zhuǎn)進(jìn)去后，有的就發(fā)生整合，在選擇壓力下，可以篩選出來(lái)，再進(jìn)一步鑒定確認(rèn)確實(shí)發(fā)生整合了。 |
4樓2013-10-09 22:23:37
咆哮的白菜
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【答案】應(yīng)助回帖
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農(nóng)桿菌介導(dǎo)是通過(guò)農(nóng)桿菌的侵染作用將質(zhì)粒轉(zhuǎn)到目的細(xì)胞內(nèi)，PEG介導(dǎo)是通過(guò)氯化鈣和PEG對(duì)DNA的附著沉積和對(duì)細(xì)胞質(zhì)膜的破壞作用，通過(guò)熱擊電擊或其他刺激作用使DNA片段進(jìn)入到原生質(zhì)體內(nèi)。不知道你是要驗(yàn)證你的轉(zhuǎn)化方法是否正確還是轉(zhuǎn)化后的問(wèn)題。轉(zhuǎn)化完成以后，在細(xì)胞內(nèi)的作用機(jī)制應(yīng)該是一樣的，至于會(huì)不會(huì)出現(xiàn)兩種結(jié)果，我認(rèn)為是肯定的，肯定會(huì)有隨機(jī)插入的和同源交換的。 個(gè)人意見，歡迎討論。 |
5樓2013-10-10 23:33:59
yini4632
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6樓2013-10-15 10:39:46
咆哮的白菜
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7樓2013-10-15 21:15:28
8樓2013-11-25 12:31:08
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9樓2022-07-25 12:14:05
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