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yini4632鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化的問題，求高手解答��！
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實驗室以前用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的雙元載體，用于構(gòu)建突變體庫的，含有GFP+潮霉素基因，我想用來檢測下自己建立的PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化體系，不知道到可以不？對于原生質(zhì)體介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化總是弄不清楚，質(zhì)粒進入原生質(zhì)體后，是不是整個質(zhì)粒隨機插入到基因組中。農(nóng)桿菌中有vir基因，可以切除T-DNA然后隨機插入，原生質(zhì)體中質(zhì)粒整合到基因組中是怎么整合上去的，跟農(nóng)桿菌介導(dǎo)區(qū)別在哪里？迷糊中。。。。。還有用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因敲除質(zhì)粒，含有同源臂的質(zhì)粒，農(nóng)桿菌介導(dǎo)后有同源重組和隨機插入2種轉(zhuǎn)化子，那這種質(zhì)粒用原生質(zhì)體介導(dǎo)是不是也會出現(xiàn)同源重組和隨機插入的轉(zhuǎn)化子？ [ Last edited by yini4632 on 2013-10-8 at 20:03 ] |
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4樓2013-10-09 22:23:37
yini4632
鐵蟲 (初入文壇)
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2樓2013-10-09 15:00:34
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3樓2013-10-09 21:18:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-11 00:03:53
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農(nóng)桿菌介導(dǎo)是通過農(nóng)桿菌的侵染作用將質(zhì)粒轉(zhuǎn)到目的細胞內(nèi)，PEG介導(dǎo)是通過氯化鈣和PEG對DNA的附著沉積和對細胞質(zhì)膜的破壞作用，通過熱擊電擊或其他刺激作用使DNA片段進入到原生質(zhì)體內(nèi)。不知道你是要驗證你的轉(zhuǎn)化方法是否正確還是轉(zhuǎn)化后的問題。轉(zhuǎn)化完成以后，在細胞內(nèi)的作用機制應(yīng)該是一樣的，至于會不會出現(xiàn)兩種結(jié)果，我認為是肯定的，肯定會有隨機插入的和同源交換的。 個人意見，歡迎討論。 |
5樓2013-10-10 23:33:59
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