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[求助]
建庫酶切問題求助��！
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| 建BAC文庫時(shí)，提取了細(xì)胞核DNA然后進(jìn)行低熔點(diǎn)瓊脂糖的包埋，制成了這個(gè)包埋塊。經(jīng)過蛋白酶K的處理后，進(jìn)行了不同濃度Hind III 的酶切，酶切了一個(gè)小時(shí)，之后跑的脈沖電泳，設(shè)置的場強(qiáng)為6V/cm，跑了20個(gè)小時(shí)。得到的這個(gè)結(jié)果。兩側(cè)的泳道是marker，中間泳道是酶切DNA的結(jié)果，設(shè)置了Hind III 酶的濃度梯度，從左到右分別為0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出來基本上沒有什么差別。很急，周圍沒有做這方面的，各位大俠指導(dǎo)一下吧！謝了��！ |
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2013-10-11 21:04:52, 158.15 K
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
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鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2013-10-17 09:33:25
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-14 21:46:29
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有沒有設(shè)對(duì)照？未酶切對(duì)照和過量酶切對(duì)照都要設(shè)。 另外從圖上可以看出你的plug質(zhì)量很差，酶切一個(gè)小時(shí)也太長了，取1/3 plug做實(shí)驗(yàn)的話，正常情況下超過不要15min�？赡艿鞍住⒍嗵腔蚨喾宇愇镔|(zhì)去除不干凈，改善方法再重新制備plug吧。 |
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淺歌99
2樓2013-10-14 16:23:54
4樓2013-10-24 14:37:03
5樓2013-10-24 14:39:42
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