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litterone123新蟲 (初入文壇)
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[求助]
有人不用試劑盒做出5’RACE嗎? 已有3人參與
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| 我最近在做5’RACE,前段時間看見有人介紹不用試劑盒也能做出5'RACE.就按他的說法來做。他的帖子上寫的“在反轉錄的過程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'這個接頭引物。在反轉錄之后這段序列就會位于整個mRNA反轉錄出來的cDNA的最前端。”我用這個引物做了反轉錄,然后用保守序列的引物對cDNA進行了擴增,確實得到了大小相符的目的片段,還心中竊喜覺得馬上大功告成了。但后來又用特異引物來擴增5’端的時候出來的帶卻在100-250之間(我的目的帶有1500左右)。降低了退火溫度也不行。請問一下有沒有人做過類似的實驗???急求 。。。 |
RACE |
鐵蟲 (正式寫手)
至尊木蟲 (著名寫手)

木蟲 (著名寫手)
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