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litterone123新蟲 (初入文壇)
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[求助]
有人不用試劑盒做出5’RACE嗎？ 已有3人參與
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| 我最近在做5’RACE，前段時間看見有人介紹不用試劑盒也能做出5'RACE.就按他的說法來做。他的帖子上寫的“在反轉(zhuǎn)錄的過程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'這個接頭引物。在反轉(zhuǎn)錄之后這段序列就會位于整個mRNA反轉(zhuǎn)錄出來的cDNA的最前端�！蔽矣眠@個引物做了反轉(zhuǎn)錄，然后用保守序列的引物對cDNA進(jìn)行了擴(kuò)增，確實(shí)得到了大小相符的目的片段，還心中竊喜覺得馬上大功告成了。但后來又用特異引物來擴(kuò)增5’端的時候出來的帶卻在100-250之間（我的目的帶有1500左右）。降低了退火溫度也不行。請問一下有沒有人做過類似的實(shí)驗(yàn)？？？急求 。。。 |
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 RACE |
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8樓2015-10-08 18:35:54
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9樓2019-08-23 16:50:40
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