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litterone123新蟲 (初入文壇)
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[求助]
有人不用試劑盒做出5’RACE嗎？ 已有3人參與
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| 我最近在做5’RACE，前段時(shí)間看見有人介紹不用試劑盒也能做出5'RACE.就按他的說(shuō)法來(lái)做。他的帖子上寫的“在反轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'這個(gè)接頭引物。在反轉(zhuǎn)錄之后這段序列就會(huì)位于整個(gè)mRNA反轉(zhuǎn)錄出來(lái)的cDNA的最前端。”我用這個(gè)引物做了反轉(zhuǎn)錄，然后用保守序列的引物對(duì)cDNA進(jìn)行了擴(kuò)增，確實(shí)得到了大小相符的目的片段，還心中竊喜覺得馬上大功告成了。但后來(lái)又用特異引物來(lái)擴(kuò)增5’端的時(shí)候出來(lái)的帶卻在100-250之間（我的目的帶有1500左右）。降低了退火溫度也不行。請(qǐng)問一下有沒有人做過(guò)類似的實(shí)驗(yàn)？？？急求 。。。 |
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 RACE |
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引路者
銅蟲 (初入文壇)
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7樓2015-10-07 19:37:50
yujitianqing
鐵蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2013-10-21 11:33:04
混沌聲神
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2014-09-22 12:07:54
Huobol
至尊木蟲 (著名寫手)
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- 性別: GG
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4樓2015-09-15 09:15:36
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