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曉風(fēng)晨曦新蟲 (初入文壇)
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[求助]
高效液相梯度洗脫耐用性試驗怎么做？求各位大神指教
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| 現(xiàn)在在做一個項目，流動相初始比例是鹽：甲醇（50:50），但是峰根本分不開，后來重新摸索了一套方法，流動相比例設(shè)成梯度的，峰是分開了，可是耐用性試驗流動相比例該怎么調(diào)，麻煩各位大神指教下，謝謝 |
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飛燕-五星巖
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2樓2013-10-23 10:06:27
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【答案】應(yīng)助回帖
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高效液相色譜(HPLC)在藥品檢驗中使用越來越普遍，尤其是在藥品的含量測定和有關(guān)物質(zhì)檢查方面。隨著低壓四元梯度HPLC儀的出現(xiàn)，使流動相的調(diào)整優(yōu)化更加方便、快捷，更容易實現(xiàn)儀器的自動化操作，因此逐漸成為高效液相色譜儀的主流配置，給使用者帶來極大的便利。許多流動相中往往含有緩沖鹽，當(dāng)使用低壓四元梯度高效液相色譜儀，儀器按設(shè)定比例，由比例閥控制相應(yīng)比例混合后，進行洗脫時，如果流動相沒有考察耐用性，有時可能會在閥后有鹽析出，且在到達柱前仍沒有溶解，這樣極易損壞活塞桿及堵塞柱子。實驗中，作者發(fā)現(xiàn)：鹽酸雷諾嗪有關(guān)物質(zhì)檢查及含量測定使用HPI C法，流動相為0．68 磷酸二氫鈉(用三乙胺調(diào)pH 至6．5±0．1)溶液一乙腈(50：50)，使用比例閥將緩沖液和乙腈分別泵送時，實驗不能正常進行。經(jīng)查，是因0．68 NaH。PO 緩沖鹽濃度偏高，當(dāng)閥后二相相遇時NaH：PO 便析出。為此做了以下試驗：分別配制濃度為0．68 和0．1 0A磷酸二氫鈉水溶液，并用三乙胺調(diào)pH至6．5±0．1；取具塞帶刻度離心管，分別按乙腈一磷酸二氫鈉(pH6．5± 0．1)溶液不同比例混合，觀察溶液的澄清度，溶液在黑背景下觀察，以蒸餾水為空白對照。結(jié)果如下表：從表中可以看到，兩相相遇時，開始都出現(xiàn)渾濁；充分振搖后，有機相乙腈比例低的流動相可溶解至澄清，但當(dāng)緩沖鹽的濃度偏高，即使振搖，析出的鹽也不可能完全溶解。另外，即使預(yù)先將兩相混合振搖后溶液澄清，但若緩沖鹽的濃度太高，如果使用低壓梯度泵分別泵送，有可能出現(xiàn)流動相混濁現(xiàn)象，而此時又不能被發(fā)現(xiàn)，此溶液進入到柱子中，輕者色譜圖會出現(xiàn)怪峰，實驗無法正常進行，嚴重時會堵柱子。通過上述討論，作者認為，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立HPLC方法時，應(yīng)注意： 1．在優(yōu)化流動相組成時，盡可能降低緩沖鹽濃度。 2．不同的實驗室，試驗條件有所差異，且柱子牌號不同，可能需要調(diào)整質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的流動相的比例(這在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中是允許的)。因此建議在耐用性實驗時，必須對緩沖鹽濃度在一定范圍內(nèi)的變化對流動相澄清度的影響等色譜耐用性進行考察。 3．等度洗脫時，應(yīng)預(yù)先將流動相混合好，并經(jīng)脫氣后再使用。 還有一篇關(guān)于“加強HPLC流動相的耐用性試驗研究”的文章，你可以看看。 |
3樓2013-10-23 10:15:53
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
曉風(fēng)晨曦: 金幣+2, ★有幫助, 好的 謝謝 2013-10-26 09:51:56
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曉風(fēng)晨曦: 金幣+2, ★有幫助, 好的 謝謝 2013-10-26 09:51:56
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其實你在摸索梯度的同時已經(jīng)對流動相組成有了選擇和探討，這是你已經(jīng)對它的組成的耐受情況有了一定的了解了。 現(xiàn)在就是微小變動一下條件，驗證一下該條件的實際耐受范圍。如果你是高壓梯度，初始流動相又是多組分，分別是是兩兩混合的，那么可以在混合時適當(dāng)改變一下比例；如果是2組分未混合而由儀器混合，那么這個就可以不用再做了，因為這是儀器之間的重現(xiàn)性問題，會由重現(xiàn)性試驗驗證的。如果是低壓梯度，可參考如上。 |
6樓2013-10-24 10:10:04
7樓2013-10-24 10:29:40
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