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qinchen1018銀蟲 (初入文壇)
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Western Blot 目標(biāo)條帶跑不出來，內(nèi)參條帶清晰 已有5人參與
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| 各位朋友幫幫忙吧，我是新手，剛學(xué)做 western blot，內(nèi)參條帶到是挺清晰，也基本一致，但是我的目標(biāo)蛋白一個(gè)條帶都沒有，這是為啥啊 |
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花開未央
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【答案】應(yīng)助回帖
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一、Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒出現(xiàn)的原因分析及解決辦法 ： 原因分析 解決辦法 1.一抗和二抗失效 1. 更換抗體；選擇現(xiàn)用現(xiàn)配的工作液 2.一抗和二抗不匹配 2. 更換為同種同屬的同亞型的抗體底物 3.發(fā)光液失效 3. 更換新的發(fā)光液 4.抗體染色不充分 4. 增加抗體濃度；延長孵育時(shí)間 5.被測樣品中不含有目的蛋白質(zhì)或者目的 蛋白質(zhì)含量太低 5. 設(shè)置陽性對照。確定標(biāo)本中是否含有目的蛋白質(zhì)； 增加樣品 的上樣量。 6. 溶液中有辣根過氧化物酶的抑制劑 6.用透析和超濾除去所用溶液中如疊氮化鈉之類的抑制劑 7.抗體活力降低 7.在抗體活力保存時(shí)間內(nèi)使用抗體；工作液現(xiàn)用現(xiàn)配 二、一抗與二抗的專一性識別檢測，就是蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用檢測，方法很多，免疫共沉淀、Pull down、MADLI-MS、能量轉(zhuǎn)移、分子篩層析等。 |
12樓2014-07-12 00:48:39
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