版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

返回列表

Qing岳

銀蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 227.5
帖子: 8
在線: 91小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2075185

[交流] 如何構(gòu)建質(zhì)粒以及提取它

我要構(gòu)建一個(gè)質(zhì)粒，但是基本的方法和過(guò)程不是很清楚，需要從最基本的開(kāi)始，請(qǐng)問(wèn)大概的步驟是怎么樣的啊。。

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

hjyxm

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有57人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

測(cè)序質(zhì)粒提不出來(lái) 已經(jīng)有6人回復(fù)
提取重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切之后什么條帶也沒(méi)有，怎么回事？？已經(jīng)有7人回復(fù)
低拷貝的質(zhì)粒如何長(zhǎng)期保存已經(jīng)有4人回復(fù)
提取質(zhì)粒遇到一個(gè)奇怪的事情，哪位大神可以提點(diǎn)一下？已經(jīng)有9人回復(fù)
質(zhì)粒鑒定是送菌種，還是送已經(jīng)提好了的質(zhì)粒好已經(jīng)有12人回復(fù)
轉(zhuǎn)化后提不出質(zhì)粒已經(jīng)有11人回復(fù)
計(jì)劃將這邊構(gòu)建的質(zhì)粒帶到國(guó)外繼續(xù)試驗(yàn)，如何運(yùn)送呢？已經(jīng)有5人回復(fù)
如何對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行鑒別已經(jīng)有7人回復(fù)
質(zhì)粒怎么會(huì)提不出來(lái)'? 已經(jīng)有12人回復(fù)
怎么區(qū)分質(zhì)粒是低拷貝還是高拷貝已經(jīng)有13人回復(fù)
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功后質(zhì)粒小提出現(xiàn)了問(wèn)題已經(jīng)有4人回復(fù)
熒光定量PCR中模板采用直接提取的DNA與構(gòu)建目標(biāo)片段質(zhì)粒模板有什么區(qū)別？已經(jīng)有6人回復(fù)
BL21(DE3)表達(dá)脂肪酶重組質(zhì)粒，將菌體顏色偏白是是怎么回事已經(jīng)有17人回復(fù)
提取質(zhì)粒的三號(hào)怎么配已經(jīng)有3人回復(fù)
【求助/交流】如何提取不帶質(zhì)粒的細(xì)菌總DNA？已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】質(zhì)粒提不出來(lái)什么原因？已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于質(zhì)粒構(gòu)建與表達(dá)的問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2013-10-30 15:49:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

hjyxm

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 9 (幼兒園)
金幣: 5220.6
帖子: 535
在線: 270小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1107889

★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

送紅花一朵
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-31 12:42:39

質(zhì)粒構(gòu)建一般是：目的序列的擴(kuò)增---與質(zhì)粒連接----轉(zhuǎn)化---再提取質(zhì)粒---鑒定；這個(gè)是分子生物學(xué)很基礎(chǔ)的東西，基本上很多分子生物學(xué)書(shū)上就有，或者相關(guān)的文獻(xiàn)！

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-10-31 09:41:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

b6122

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
金幣: 2987.9
帖子: 636
在線: 46.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 172913

★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-31 12:42:48

最好去分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)10天，就什么都知道了。

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2013-10-31 11:46:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

gan19920717

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 434
帖子: 60
在線: 16.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1481671

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

首先你得分別把含有目的基因和空載克隆載體的菌種養(yǎng)出來(lái)，一般過(guò)夜，然后用質(zhì)粒提取試劑盒分別提取他們，pcr你的目的基因，同種酶雙酶切載體與目的基因，構(gòu)建酶連體系，然后你構(gòu)建出了重組質(zhì)粒，隨后再進(jìn)行相關(guān)鑒定~~ 可參考下相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)上有相關(guān)的步驟方法

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2013-11-02 09:01:15

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

眾星攬?jiān)?/a>

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 3
帖子: 9
在線: 1.1小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 4048425

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

1. 通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因片段
PCR要設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)引物時(shí)要選擇合適的同源序列，根據(jù)質(zhì)粒載體和基因序列要選擇合適的酶切位點(diǎn)，PCR的產(chǎn)物要純化。
2. 酶切
根據(jù)引物設(shè)計(jì)的酶切位點(diǎn)，分別對(duì)PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體進(jìn)行酶切，酶切后的產(chǎn)物也要進(jìn)行回收
3. 連接
通過(guò)連接酶將酶切后的PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體進(jìn)行連接
4. 轉(zhuǎn)化
將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到受體菌中（一般為DH5a），涂板，培養(yǎng)過(guò)夜
5. 挑取單克隆，并鑒定
挑去平板上的單克隆培養(yǎng)，可以通過(guò)PCR或者酶切初步鑒定陽(yáng)性克隆，對(duì)初步鑒定出來(lái)的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序

英格恩 Engreen

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2015-09-02 11:37:06

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 Qing岳的主題更新

返回列表

普通表情龍兔虎貓高級(jí)回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 281求調(diào)劑（0805） +3	煙汐憶海 2026-03-16	9/450	2026-03-18 07:23 by 煙汐憶海
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +7	yangfz 2026-03-17	7/350	2026-03-17 23:57 by 星空星月
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3	Eember. 2026-03-17	7/350	2026-03-17 20:20 by 花125533
[考研] 341求調(diào)劑 +5	搗蛋豬豬 2026-03-11	7/350	2026-03-17 19:09 by 搗蛋豬豬
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3	1喜春8 2026-03-17	5/250	2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動(dòng)化所實(shí)習(xí) +6	Losir 2026-03-12	7/350	2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 考研調(diào)劑 +3	淇ya_~ 2026-03-17	5/250	2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 278求調(diào)劑 +3	Yy7400 2026-03-13	3/150	2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +5	Liwangman 2026-03-15	5/250	2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5	ly3471z 2026-03-13	5/250	2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 085600調(diào)劑 +5	漾漾123sun 2026-03-12	6/300	2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 327求調(diào)劑 +6	拾光任染 2026-03-15	11/550	2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3	孟鑫材料 2026-03-14	3/150	2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4	快樂(lè)的香蕉 2026-03-11	4/200	2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 304求調(diào)劑 +6	Mochaaaa 2026-03-12	7/350	2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 求調(diào)劑（材料與化工327） +4	愛(ài)吃香菜啦 2026-03-11	4/200	2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 307求調(diào)劑 +5	超級(jí)伊昂大王 2026-03-12	5/250	2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 求調(diào)劑 +3	程雨杭 2026-03-12	3/150	2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3	土木小天才 2026-03-12	3/150	2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9	42838695 2026-03-12	9/450	2026-03-13 10:16 by houyaoxu