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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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Qing岳

銀蟲 (初入文壇)

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[交流] 如何構(gòu)建質(zhì)粒以及提取它

我要構(gòu)建一個(gè)質(zhì)粒，但是基本的方法和過(guò)程不是很清楚，需要從最基本的開(kāi)始，請(qǐng)問(wèn)大概的步驟是怎么樣的啊。。

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hjyxm

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1樓 2013-10-30 15:49:33

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眾星攬?jiān)?/a>

新蟲 (初入文壇)

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1. 通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因片段
PCR要設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)引物時(shí)要選擇合適的同源序列，根據(jù)質(zhì)粒載體和基因序列要選擇合適的酶切位點(diǎn)，PCR的產(chǎn)物要純化。
2. 酶切
根據(jù)引物設(shè)計(jì)的酶切位點(diǎn)，分別對(duì)PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體進(jìn)行酶切，酶切后的產(chǎn)物也要進(jìn)行回收
3. 連接
通過(guò)連接酶將酶切后的PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體進(jìn)行連接
4. 轉(zhuǎn)化
將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到受體菌中（一般為DH5a），涂板，培養(yǎng)過(guò)夜
5. 挑取單克隆，并鑒定
挑去平板上的單克隆培養(yǎng)，可以通過(guò)PCR或者酶切初步鑒定陽(yáng)性克隆，對(duì)初步鑒定出來(lái)的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序

英格恩 Engreen

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5樓2015-09-02 11:37:06

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hjyxm

木蟲 (正式寫手)

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-31 12:42:39

質(zhì)粒構(gòu)建一般是：目的序列的擴(kuò)增---與質(zhì)粒連接----轉(zhuǎn)化---再提取質(zhì)粒---鑒定；這個(gè)是分子生物學(xué)很基礎(chǔ)的東西，基本上很多分子生物學(xué)書上就有，或者相關(guān)的文獻(xiàn)！

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2樓2013-10-31 09:41:40

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b6122

木蟲 (正式寫手)

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-10-31 12:42:48

最好去分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)10天，就什么都知道了。

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3樓2013-10-31 11:46:23

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gan19920717

鐵蟲 (小有名氣)

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首先你得分別把含有目的基因和空載克隆載體的菌種養(yǎng)出來(lái)，一般過(guò)夜，然后用質(zhì)粒提取試劑盒分別提取他們，pcr你的目的基因，同種酶雙酶切載體與目的基因，構(gòu)建酶連體系，然后你構(gòu)建出了重組質(zhì)粒，隨后再進(jìn)行相關(guān)鑒定~~ 可參考下相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)上有相關(guān)的步驟方法

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4樓2013-11-02 09:01:15

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