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stephenallan金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
DGGE跑膠，為啥PCR產(chǎn)物一直停留在濃縮膠，沒(méi)有往變性膠跑下去？？
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最近在做DGGE，PCR產(chǎn)物一直停在點(diǎn)樣孔下面，電泳就跑到濃縮膠底，沒(méi)有再往變性膠跑。 PCR產(chǎn)物約在250bp. 變性膠10%gel，梯度試了兩個(gè)35-55%，,55-70%，都沒(méi)有成功。 電泳條件：80V，13h；300,3h；200v，5h都試了，一樣沒(méi)有跑下去。 想了好久，排除了一些原因，還是沒(méi)有 弄明白！ 求助，這是什么原因？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:31:42
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 沒(méi)圖嘛... 1、檢查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常 2、你換一下引物，引物的bp值不要太大了，199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的) 3、調(diào)整下上樣量，往小了調(diào)，比如5μl的可以換成3μl或者2μl的 4、雖然不太可能，但是檢查下你的膠有沒(méi)有灌反了，從上到下是不是低到高的 5、你可以先用高電壓比如240V把DNA先沖下來(lái)，然后換到差不多130-140V這樣跑5-6小時(shí) 或者80過(guò)夜跑個(gè)14-15個(gè)小時(shí)這樣 祝實(shí)驗(yàn)順利... |
2樓2013-11-02 21:20:13
stephenallan
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3樓2013-11-02 22:15:14
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4樓2013-11-04 16:07:14
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10樓2013-11-27 00:29:06
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