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永遠不知道至尊木蟲 (著名寫手)
金花家族創(chuàng)始人
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[求助]
關(guān)于蛋白質(zhì)的跑膠
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1.什么是變性膠，什么是非變性膠，我跑的是SDS-PAGE，跑完后蛋白是否具有活性 2.什么是連續(xù)膠，什么是不連續(xù)膠 3.做目的蛋白的抗體前需要先知道蛋白的那些性質(zhì)？ |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓访恳惶� 2013-04-17 10:16:35
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓访恳惶� 2013-04-17 10:16:35
| SDS是強離子去垢劑，破壞蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)，并與擔(dān)保結(jié)合使其帶負(fù)電荷。SDS-PAGE的樣品已經(jīng)完全失去生物活性，不管蛋白質(zhì)的天然等電點如何，都是從負(fù)極向正極跑的。做目的抗體的抗原來源可以做全蛋白表達、部分蛋白表達或者是合成肽段。如果做全蛋白表達的話，直接把目的蛋白的序列克隆到大腸桿菌里過表達后純化。如果做部分蛋白表達或者合成肽段，需要分析蛋白的表面抗原性。 |
5樓2013-04-17 07:32:19
梁以薰
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
永遠不知道: 金幣+5, ★有幫助, 謝謝 2013-04-17 16:31:56
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3.做目的蛋白的抗體前需要先知道蛋白的那些性質(zhì)？ 那要看你的具體目的，如果直接就是需要做個該蛋白質(zhì)的單克隆抗體，就直接知道分子量和序列就行，關(guān)鍵是免疫實驗動物后的免疫原性。如果你要想確定該蛋白質(zhì)的具體抗原免疫簇，那就要利用NMR，X-ray diffraction測定抗原-抗體的結(jié)合位點的結(jié)構(gòu)，或者用基因敲處目的蛋白質(zhì)的相關(guān)氨基酸來影響其免疫原性，或者對目的蛋白質(zhì)的有關(guān)的氨基酸進行化學(xué)修飾來影響其免疫原性，還可以直接用電子顯微鏡或者原子力顯微鏡直接觀測抗原-抗體的相互作用來確定抗原的抗原免疫簇。要在研究該蛋白質(zhì)的其他與免疫有關(guān)的特征，好需要其他具體信息。。。 |
8樓2013-04-17 11:57:40
永遠不知道
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凌波麗
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10樓2013-04-17 21:15:52
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