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永遠(yuǎn)不知道至尊木蟲 (著名寫手)
金花家族創(chuàng)始人
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[求助]
關(guān)于蛋白質(zhì)的跑膠
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1.什么是變性膠,什么是非變性膠,我跑的是SDS-PAGE,跑完后蛋白是否具有活性 2.什么是連續(xù)膠,什么是不連續(xù)膠 3.做目的蛋白的抗體前需要先知道蛋白的那些性質(zhì)? |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
| SDS是強(qiáng)離子去垢劑,破壞蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu),并與擔(dān)保結(jié)合使其帶負(fù)電荷。SDS-PAGE的樣品已經(jīng)完全失去生物活性,不管蛋白質(zhì)的天然等電點(diǎn)如何,都是從負(fù)極向正極跑的。做目的抗體的抗原來源可以做全蛋白表達(dá)、部分蛋白表達(dá)或者是合成肽段。如果做全蛋白表達(dá)的話,直接把目的蛋白的序列克隆到大腸桿菌里過表達(dá)后純化。如果做部分蛋白表達(dá)或者合成肽段,需要分析蛋白的表面抗原性。 |
木蟲 (著名寫手)

金蟲 (正式寫手)
御林軍

木蟲 (小有名氣)

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3.做目的蛋白的抗體前需要先知道蛋白的那些性質(zhì)? 那要看你的具體目的,如果直接就是需要做個(gè)該蛋白質(zhì)的單克隆抗體,就直接知道分子量和序列就行,關(guān)鍵是免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后的免疫原性。如果你要想確定該蛋白質(zhì)的具體抗原免疫簇,那就要利用NMR,X-ray diffraction測(cè)定抗原-抗體的結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu),或者用基因敲處目的蛋白質(zhì)的相關(guān)氨基酸來影響其免疫原性,或者對(duì)目的蛋白質(zhì)的有關(guān)的氨基酸進(jìn)行化學(xué)修飾來影響其免疫原性,還可以直接用電子顯微鏡或者原子力顯微鏡直接觀測(cè)抗原-抗體的相互作用來確定抗原的抗原免疫簇。要在研究該蛋白質(zhì)的其他與免疫有關(guān)的特征,好需要其他具體信息。。。 |
至尊木蟲 (著名寫手)
金花家族創(chuàng)始人
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