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stephenallan金蟲 (小有名氣)
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[求助]
DGGE跑膠,為啥PCR產(chǎn)物一直停留在濃縮膠,沒有往變性膠跑下去??
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最近在做DGGE,PCR產(chǎn)物一直停在點(diǎn)樣孔下面,電泳就跑到濃縮膠底,沒有再往變性膠跑。 PCR產(chǎn)物約在250bp. 變性膠10%gel,梯度試了兩個(gè)35-55%,,55-70%,都沒有成功。 電泳條件:80V,13h;300,3h;200v,5h都試了,一樣沒有跑下去。 想了好久,排除了一些原因,還是沒有 弄明白! 求助,這是什么原因? |
金蟲 (小有名氣)
![]() 沒圖嘛... 1、檢查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常 2、你換一下引物,引物的bp值不要太大了,199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的) 3、調(diào)整下上樣量,往小了調(diào),比如5μl的可以換成3μl或者2μl的 4、雖然不太可能,但是檢查下你的膠有沒有灌反了,從上到下是不是低到高的 5、你可以先用高電壓比如240V把DNA先沖下來,然后換到差不多130-140V這樣跑5-6小時(shí) 或者80過夜跑個(gè)14-15個(gè)小時(shí)這樣 祝實(shí)驗(yàn)順利... |
金蟲 (小有名氣)
金蟲 (小有名氣)
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