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small521

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 同尾酶連接效率問(wèn)題，求助

我有一個(gè)已經(jīng)連接上載體的大片段，為xhoI連接，我的目的載體上面沒(méi)有xhoI這個(gè)位點(diǎn)，但是有SalI，我打算利用這個(gè)同尾酶進(jìn)行連接，不過(guò)因?yàn)檩d體自連，至今也沒(méi)有篩到陽(yáng)性，不知有沒(méi)有做過(guò)同尾酶連接的大師幫我看看，我這么做有沒(méi)有問(wèn)題，還想問(wèn)問(wèn)這樣的同尾酶連接有沒(méi)有連上的可能，效率高不高？

還有，我是大片段連接，片段約12k，載體5k，連接起來(lái)比較費(fèi)勁，不過(guò)前人已經(jīng)有連接的成功案例，只是人家是雙酶切，和我這有些不同，還有沒(méi)有做過(guò)的高人指點(diǎn)一二，謝了

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1樓 2013-11-05 14:04:35

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small521

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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2樓: Originally posted by gaohuihui at 2013-11-05 16:00:41
XhoI SalI同尾酶很好連接的，載體自連是你載體去磷效果不好啊

我沒(méi)有去磷酸化，因?yàn)槲規(guī)熜终f(shuō)去了效果也不好，自連也會(huì)很多，而且會(huì)影響非自連的效率，那如果連接效率高的話那我就放心篩了，謝謝了

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3樓2013-11-05 16:05:10

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gaohuihui

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-05 18:15:30

XhoI SalI同尾酶很好連接的，載體自連是你載體去磷效果不好啊

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2樓2013-11-05 16:00:41

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cicelyzh

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去磷酸化后一般載體的自連可以降低到接近0。雙酶切可以不用，單酶切的話一般是要取磷酸化的，否則自連的概率太高了。

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4樓2013-11-06 07:55:44

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