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[求助]
【求助】新手想在目標(biāo)蛋白后加Flag tag方法請教
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| 實驗室有質(zhì)粒帶有目標(biāo)蛋白，但不帶TAG，現(xiàn)在想在蛋白后加flag以用于后期蛋白質(zhì)提取、純化。在網(wǎng)上一時沒搜尋到資料，故在此發(fā)帖。如何從何做起呢，方法有哪些，有經(jīng)驗的蟲友請不吝賜教�。�！ |
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yang0071
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2樓2013-11-12 17:06:57
jasco
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, MolEPI+1, 鼓勵發(fā)帖交流！ 2013-11-12 17:57:44
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amisking: 金幣+2, MolEPI+1, 鼓勵發(fā)帖交流！ 2013-11-12 17:57:44
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如果已有的質(zhì)粒上的目的序列是酶切連上去的，那就 1. 酶切，留載體框架 2.用質(zhì)粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（順序別反了），回收pcr產(chǎn)物，酶切 3.連接，1+2即可 如果是重組方式構(gòu)建的， 1.需要原始不帶目的序列的載體 2.用質(zhì)粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（順序別反了）還有重組位點(diǎn)序列，回收pcr產(chǎn)物 3.重組，1+2 |
3樓2013-11-12 17:14:30
4樓2013-11-12 20:27:55
5樓2013-11-12 20:29:42
yang0071
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6樓2013-11-14 08:58:42
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7樓2013-11-19 11:21:46
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