版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

返回列表

wumiaolemon

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 267.4
帖子: 34
在線: 29.5小時(shí)
蟲號(hào): 1615309
注冊(cè): 2012-02-13
性別: MM
專業(yè): 環(huán)境污染化學(xué)

[求助] 蛋白質(zhì)-瓊脂糖電泳技術(shù)

請(qǐng)問(wèn)一下誰(shuí)有蛋白質(zhì)-瓊脂糖凝膠電泳的實(shí)驗(yàn)步驟啊，包括各種試劑和配方方法，我們本來(lái)要做SDS-Page,但是老師說(shuō)是試劑毒性比較大，換成瓊脂-蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)，三十找不到方法，求各位高手指導(dǎo)

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有152人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)咨詢已經(jīng)有5人回復(fù)
為什么還原變性電泳得到的分子量應(yīng)該大于非還原非變性？？急求！已經(jīng)有8人回復(fù)
關(guān)于蛋白電泳染色已經(jīng)有4人回復(fù)
蛋白質(zhì)的凝膠電泳中泳道很明顯但是條帶不清楚的原因已經(jīng)有3人回復(fù)
蛋白質(zhì)印跡目的蛋白質(zhì)量測(cè)定已經(jīng)有5人回復(fù)
膠原蛋白的電泳為什么跑不出來(lái)？已經(jīng)有21人回復(fù)
瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)和實(shí)驗(yàn)技巧已經(jīng)有58人回復(fù)
【求助/交流】蛋白電泳圖的mark跑成了這個(gè)樣子求各路高人解釋已經(jīng)有10人回復(fù)
DNA瓊脂糖凝膠電泳所需DNA的最低濃度已經(jīng)有6人回復(fù)
瓊脂糖凝膠電泳跑的時(shí)間長(zhǎng)了是不是就會(huì)出現(xiàn)拖尾呀？已經(jīng)有10人回復(fù)
請(qǐng)問(wèn)哪位高手用瓊脂糖電泳跑過(guò)蛋白？已經(jīng)有10人回復(fù)
蛋白質(zhì)電泳拖尾已經(jīng)有7人回復(fù)
瓊脂糖凝膠電泳圖分析已經(jīng)有11人回復(fù)
電泳-分離膠凝得很慢！！已經(jīng)有14人回復(fù)
【求助】硼酸脂的分離已經(jīng)有4人回復(fù)

1樓 2013-11-15 16:18:13

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

myprayer

專家顧問(wèn) (著名寫手)

MolEPI: 12
應(yīng)助: 81 (初中生)
貴賓: 2.822
金幣: 32408.7
散金: 1696
紅花: 159
沙發(fā): 3
帖子: 2275
在線: 822.5小時(shí)
蟲號(hào): 1759711
注冊(cè): 2012-04-16
專業(yè): 生物力學(xué)與生物流變學(xué)
管轄: 生物醫(yī)藥區(qū)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-16 18:03:48
wumiaolemon: 金幣+10, ★有幫助 2013-12-25 18:05:27

不知道你說(shuō)的蛋白質(zhì)具體指什么，這里給你提供的是血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳。
將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過(guò)的血清置于瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分離。通電后，脂蛋白向正極移動(dòng)，并分離為幾個(gè)區(qū)帶。
原理
將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過(guò)的血清置于瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分離。通電后，脂蛋白向正極移動(dòng)，并分離為幾個(gè)區(qū)帶。
操作
1．預(yù)染血清：血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml于小試管中，混合后置37℃水浴染色30分鐘，然后離心(2000轉(zhuǎn)/分，約5分鐘)。
2．制備瓊脂糖凝膠板：將已配制的0.45%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化，用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片，每片2.5ml，靜置約半小時(shí)后凝固(天熱時(shí)需延長(zhǎng)，可放冰箱數(shù)分鐘加速凝固)。
3．點(diǎn)加血清：已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cm處，用切口刀片垂直切入凝膠后立即取出，然后用銅絲小匙將長(zhǎng)方小條凝膠取出。以小片濾紙吸干小槽中水分，用血色素吸管吸取經(jīng)過(guò)預(yù)染的血清約15μl，注入凝膠板上的小槽內(nèi)。
4．電泳：將加過(guò)血清的凝膠板平行放入電泳槽中，樣品應(yīng)在陰極一端。兩塊三層紗布于巴比妥緩沖液中浸潤(rùn)，然后輕輕緊密貼在凝膠板兩端，紗布的另一端浸于電泳槽內(nèi)的巴比妥緩沖液(注意：此電極緩沖液不能用三羥甲烷緩沖液代替)。接通電源，電壓為120~130V，每片電流為3~4mA。約經(jīng)電泳15至55分鐘，即可見分離之色帶。

注意事項(xiàng)

1．電泳樣品要求為新鮮的空腹血清。

2．每一塊凝膠上可平行挖兩條小槽，因而可加兩個(gè)樣品。

3．如果用一形狀大小和小槽一樣的有機(jī)玻璃片，在瓊脂糖膠凝固前固定于適當(dāng)位子上，當(dāng)凝固后取出有機(jī)玻璃片，凝膠板上留下小槽可直接加樣，不需挖槽。

4．如果需要保留電泳樣本，可將電泳后之凝膠板(連同玻片)放于清水中浸泡脫鹽2小時(shí)，然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。

試劑與器材

1．巴比緩沖液(pH8.6，離子強(qiáng)度0.075)：為電極緩沖液

巴比妥鈉15.4g，巴比妥2.76g，EDTA酸0.292g，加水溶解后加水至1000ml

2．三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.6)為凝膠緩沖液

三甲基氨基甲烷1.212g，EDTA酸0.29g，NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml

3．瓊脂糖凝膠

瓊脂糖0.45g，三痙甲基氨基甲烷緩沖液50ml，水50ml

加熱至沸，待瓊脂糖溶解后立即停止加熱。

4．挖槽工具制作

切口刀：刀口長(zhǎng)15mm的刀片，中央夾一有機(jī)玻璃或木片，用螺絲固定，使兩刀片相距1.5mm。挖槽小匙：用直徑1.5mm的銅絲約6cm長(zhǎng)，一端錘成扁平，用砂紙磨光。
5．電泳槽和電泳儀：同血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的儀器。

贊一下(1人)