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關(guān)于PCR產(chǎn)物的幾個(gè)問(wèn)題
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1.我PCR體系配完以后，如果不立即進(jìn)行PCR的話，應(yīng)該放在4度還是-20度進(jìn)行保存？最多能保存多長(zhǎng)時(shí)間？為什么？ 2.我做完P(guān)CR以后，如果PCR產(chǎn)物不立即進(jìn)行檢測(cè)，PCR產(chǎn)物應(yīng)放4度還是-20度進(jìn)行保存？最多能保存多長(zhǎng)時(shí)間？為什么？ 3.如果我在PCR產(chǎn)物中點(diǎn)上loading buffer，并不立即進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)放哪個(gè)溫度進(jìn)行保存？最多能保存多長(zhǎng)時(shí)間？為什么？ 4.如果我用的是MIX體系配的PCR，那么跑聚丙烯酰胺的話，上樣的時(shí)候是否要點(diǎn)上樣緩沖液。MIX是康博公司生產(chǎn)的。 謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的精彩。 2013-11-16 13:55:17
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的精彩。 2013-11-16 13:55:17
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第一個(gè)問(wèn)題，應(yīng)該放在-20那樣的話保存的時(shí)間長(zhǎng)一些，低溫抑制酶的反應(yīng)活性，要是加完酶沒(méi)具體試過(guò)能保存多長(zhǎng)時(shí)間，但是一兩天應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的，放4度的話估計(jì)也就半天。 第二，產(chǎn)物兩者都可以，放在4度的一般僅可以保存4,5天，因?yàn)镻CR反應(yīng)中的一些物質(zhì)會(huì)影響DNA的保存，放在-20的話保存一個(gè)月應(yīng)該是肯定沒(méi)問(wèn)題的，建議-20保存 第三，加完loading buffer也建議放在-20loading buffer的成分主要是甘油和蔗糖主要目的是染色和沉淀DNA的所以和保存產(chǎn)物的應(yīng)該一樣 第四個(gè)沒(méi)有具體做過(guò)，但是覺得應(yīng)該是需要加上樣緩沖液的 一般都建議-20保存，可以更長(zhǎng)時(shí)間的保存 |
2樓2013-11-16 11:12:07
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