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moemoe新蟲 (初入文壇)
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請(qǐng)教一種合適的測(cè)蛋白質(zhì)含量的方法？凱氏定氮還是BCA
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| 我做的是發(fā)酵液中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，發(fā)酵后樣品中三氯乙酸可溶性氮含量的測(cè)定，想請(qǐng)教各位大俠用凱氏定氮法比較好還是BCA試劑盒測(cè)的準(zhǔn)確？我樣品中TCA-NSI含量不高，最高也只有百分之二多， 求助各位前輩指點(diǎn)！！感激不盡�。� |
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hl16010921
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moemoe4樓2013-11-23 20:44:22
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare: 金幣+2, 謝謝參與 2013-11-29 09:18:49
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BCA 試劑盒是基于在堿性條件下，Cu2+ 被蛋白還原成Cu+，進(jìn)而發(fā)生高敏感性和選擇性的顏色變化，通過分光測(cè)定，精確定量蛋白質(zhì)濃度。 與Bradford 蛋白檢測(cè)一起并列成為最為準(zhǔn)確的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法。 其特點(diǎn)在于1、高兼容性，尤其適用于表面活性劑存在下的蛋白濃度檢測(cè)，如細(xì)胞或組織的蛋白提取物。2、高敏感度�？删_定量 1～2000 μg/ml 蛋白樣品。 BCA試劑一般不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20，60，80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于1 mM，β-巰基乙醇低于10 mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇低于1 mM，β-巰基乙醇低于1 mM。 凱氏定氮法靈敏度低，用于0.2~ 1.0mg氮，誤差為±2％，費(fèi)時(shí)8～10h。但非蛋白氮會(huì)對(duì)其有干擾。 就你的檢測(cè)樣品，我覺得BCA肯定更為合適。 |
2樓2013-11-23 19:27:57
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3樓2013-11-23 20:02:10
5樓2013-11-24 09:35:45
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8樓2013-11-26 21:10:42
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9樓2013-11-26 21:11:51
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