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liangpz鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
提取RNA時,有誰用過水飽和酚配試劑嗎?幾個提取相關(guān)問題,求幫助啊!
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新人最近提植物的RNA,老板指定用一個新改進(jìn)的CTAB/酸酚法。有幾處不懂的地方想問問提取RNA的前輩們~~回答有用的話有金幣啦,請大家?guī)蛶兔Π。。 1 方法文獻(xiàn)里面是:Extraction buffer II Acidic phenol (pH 4.5) (Sigma,USA), 2.5 M sodium chloride (Sigma, USA), 0.5% SDS. 這是用水飽和酚做緩沖液Ⅱ的溶劑的意思嗎,要配置100ml的緩沖液Ⅱ,就吸取100ml水飽和酚,直接向里面加入NaCl和SDS溶解就行了? 水飽和酚是吸取下層使用嗎?最后配好緩沖液后,用吸取一些原來水飽和酚的上層保護(hù)液進(jìn)行保護(hù)嗎? 2 緩沖液Ⅰ是:CTAB, 2% (w/v);3.5 M 硫氰酸胍 (GTC);100 mM 檸檬酸緩沖液 (pH 4.5);3 M 醋酸鉀;1.0% 十二烷基磺酸鈉 (SDS) (使用前加入);RNase-free水定容。 想問問大家,配含有CTAB的試劑時,是不是應(yīng)該最后加CTAB?否則配出來的試劑最上面會有一層白色的沫,感覺像是CTAB不溶,即便搖勻也一會兒就又分層了。 3 最后是配好的試劑用高壓滅菌嗎?異硫氰酸胍和水飽和酚都不穩(wěn)定,都不能滅吧?就只剩下 LiCl能滅一下了。 |
鐵蟲 (小有名氣)
銀蟲 (小有名氣)
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樓主這方法就是異硫氰酸胍的提RNA方法,是很成熟的一種提法,是我們實驗室通用的,我經(jīng)常用這個方法,很好用,我發(fā)給你吧。你看了還有問題再問。 百度網(wǎng)盤鏈接http://pan.baidu.com/s/1zPclO |

銀蟲 (小有名氣)

鐵蟲 (小有名氣)
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