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[交流]
為什么提取的DNA總是降解？ 已有27人參與
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各位大俠，為什么我提取的DNA總是降解呢？用的是傳統(tǒng)的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的時候能看到大量的絮狀沉淀，TE溶解過夜，瓊脂糖膠檢測時條帶卻是這樣(如圖）。分光光度計檢測濃度和純度都正常。實驗室?guī)讉�人提取都是這樣，不知道是什么原因，所用的試劑已經(jīng)重新配過，還是這個結果。請問有沒有遇到過類似情況的，這是什么原因，怎么解決呢？請大家指點幫助~ |
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silicare
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2樓2011-08-18 14:27:01
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5樓2011-08-18 18:08:52
adslye
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
看天(金幣+4): 鼓勵回答 2011-08-18 23:50:56
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
看天(金幣+4): 鼓勵回答 2011-08-18 23:50:56
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gDNA降解無非兩個原因： 1.細胞內DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前沒有在細胞破碎的情況下放久吧？ 2.機械力作用：有很劇烈的長時間渦旋嗎？或者之類的。但一般也不會有事。 另外，至于PH，水飽和酚（PH4）條件下，gDNA溶于有機相，應該提不出來。TRIS飽和酚，如果過期也是蛋白除不盡。我覺得應該不是酚的問題。 我看你第二張圖最后一孔gDNA正常，沒降解。是同同批次，同操作嗎？如果是，說明操作失誤。 我的解決方法是：不要再去想了（這個實驗真的很難做出降解  ）。換一個方法，買一個kit，gDNA提取試劑盒很便宜的。 |
6樓2011-08-18 19:14:12
rioarsenal
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7樓2011-08-18 21:52:24
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8樓2011-08-18 22:50:18
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9樓2011-08-19 08:33:33
10樓2011-08-19 08:48:50
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