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[交流]
為什么提取的DNA總是降解？ 已有27人參與
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各位大俠，為什么我提取的DNA總是降解呢？用的是傳統(tǒng)的苯酚-氯仿抽提的方法，最后一步加入冰乙醇沉淀的時(shí)候能看到大量的絮狀沉淀，TE溶解過(guò)夜，瓊脂糖膠檢測(cè)時(shí)條帶卻是這樣(如圖）。分光光度計(jì)檢測(cè)濃度和純度都正常。實(shí)驗(yàn)室?guī)讉�(gè)人提取都是這樣，不知道是什么原因，所用的試劑已經(jīng)重新配過(guò)，還是這個(gè)結(jié)果。請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有遇到過(guò)類(lèi)似情況的，這是什么原因，怎么解決呢？請(qǐng)大家指點(diǎn)幫助~ |
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silicare
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2樓2011-08-18 14:27:01
水泗晶
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29樓2012-03-23 18:53:46
leebiao
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5樓2011-08-18 18:08:52
adslye
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看天(金幣+4): 鼓勵(lì)回答 2011-08-18 23:50:56
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看天(金幣+4): 鼓勵(lì)回答 2011-08-18 23:50:56
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gDNA降解無(wú)非兩個(gè)原因： 1.細(xì)胞內(nèi)DNA酶作用于gDNA，你的材料在放入提取液前沒(méi)有在細(xì)胞破碎的情況下放久吧？ 2.機(jī)械力作用：有很劇烈的長(zhǎng)時(shí)間渦旋嗎？或者之類(lèi)的。但一般也不會(huì)有事。 另外，至于PH，水飽和酚（PH4）條件下，gDNA溶于有機(jī)相，應(yīng)該提不出來(lái)。TRIS飽和酚，如果過(guò)期也是蛋白除不盡。我覺(jué)得應(yīng)該不是酚的問(wèn)題。 我看你第二張圖最后一孔gDNA正常，沒(méi)降解。是同同批次，同操作嗎？如果是，說(shuō)明操作失誤。 我的解決方法是：不要再去想了（這個(gè)實(shí)驗(yàn)真的很難做出降解  ）。換一個(gè)方法，買(mǎi)一個(gè)kit，gDNA提取試劑盒很便宜的。 |
6樓2011-08-18 19:14:12
rioarsenal
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