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lousulin金蟲 (小有名氣)
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[求助]
跪求分子高手指點:品種間的基因序列差異,可以忽視,直接轉(zhuǎn)基因嗎?
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本人最近從一種花中擴增一個基因,準備轉(zhuǎn)進另外一個物種。但是測序結(jié)果發(fā)現(xiàn):擴增的基因和NCBI上報道的基因序列存在17個堿基的差異,98%的同源性(突變位置均勻分布,且多次獨立試驗結(jié)果重復,故排除PCR等操作過程造成的基因突變),應該是由于不同品種造成的序列差異,關鍵是蛋白發(fā)生移碼了。 NCBI上報道的該基因是具有酶活催化功能的,但我擴增得到的序列有差異的基因,我不能確定它是否也具有該酶活。心里沒底啊,轉(zhuǎn)基因之后會不會沒有表型?不敢進一步往下做啦,求高手指點。不勝感激。! |
至尊木蟲 (著名寫手)
金蟲 (正式寫手)
鐵桿木蟲 (文壇精英)
至尊木蟲 (知名作家)
不良人
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盯了好久,看了有點頭疼!因為我是菜鳥 看樓主的描述,應該是擴增的CDNA,序列相似性高達98%,但氨基酸序列發(fā)生移碼,不能高度匹配了,這算同一基因在不同種間的差別,還是理解為基因家族成員間的差別呢? 統(tǒng)一樓上的說法,既然樓主研究酶,做酶活應該是很靠譜的。 樓主可以對測序結(jié)果進行編碼蛋白預測,然后就目標蛋白進行blast比對,看有無與之相對的蛋白。 先給自己的基因定性,會不會是一個新的基因呢?是否獲得了全長CDNA? 轉(zhuǎn)化是驗證基因功能鏈條的一方面,周期太長,結(jié)果難以預測,樓主在嘗試的同時,可以考慮圍繞基因做點表達水平,啟動子方面的東西來豐富實驗內(nèi)容。 我只是想到哪說到哪里,建議樓主還是多問問老師及師兄,再設計實驗流程,三思后行! |

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