zhuyanran

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[求助] 關(guān)于tricine-sds-page的一些問題

我在跑小分子多肽電泳時，有幾個問題想請大家給指導(dǎo)一下
（1）在濃縮膠和夾層膠條帶都是壓成一條線的，可是一進分離膠就擴散的很嚴(yán)重
（2）我的樣品為什么在loading buffer里溶解后loading buffer和樣品分層呢，上樣時有白色沉淀
（3）現(xiàn)在marker跑的挺好的，可是樣品死活跑不出來，而且分離膠擴散很嚴(yán)重
希望高手指點一二，謝謝啦！

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1樓 2013-11-27 10:03:08

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-11-27 13:29:50
zhuyanran: 金幣+5, ★有幫助, 希望多多指導(dǎo)，還有很多要請教的，謝謝了！ 2013-11-27 20:40:55

1. 你指溴酚藍前沿擴散嗎？
2. 懷疑你的樣品本身含有一些成分，與SDS發(fā)生沉淀。你的樣品是怎樣提取的，有什么特殊試劑？
3. marker好說嘛膠沒有問題。是樣品本身的問題。我覺得你樣品制備本身可能用了一些不相容的試劑。

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2樓2013-11-27 12:46:34

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-27 12:46:34
1. 你指溴酚藍前沿擴散嗎？
2. 懷疑你的樣品本身含有一些成分，與SDS發(fā)生沉淀。你的樣品是怎樣提取的，有什么特殊試劑？
3. marker好說嘛膠沒有問題。是樣品本身的問題。我覺得你樣品制備本身可能用了一些不相容的 ...

您好，我用的loading buffer是G-250，我的樣品是微生物的胞外產(chǎn)物，我就用Nacl 離子交換純化和水過分子篩純化做的，沒有用什么特殊的試劑，我用的loading buffer是參照2006年的tricine- sds-page來做的，配方是12%SDS,6%巰基乙醇，30%甘油，0.05%G-250,150mM Tris-cl， pH 6.8. 不知道這是不是有什么問題。在濃縮膠和夾層膠壓縮的特別好，但是一進分離膠就擴散的很嚴(yán)重。

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3樓2013-11-27 14:39:32

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3樓: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-27 14:39:32
您好，我用的loading buffer是G-250，我的樣品是微生物的胞外產(chǎn)物，我就用Nacl 離子交換純化和水過分子篩純化做的，沒有用什么特殊的試劑，我用的loading buffer是參照2006年的tricine- sds-page來做的，配方是12 ...

你的loading buffer應(yīng)該沒有什么問題。樣品的離子強度大對PAGE的影響很大，比方說含有較高濃度的鹽或者磷酸根。如果marker沒有問題，只能是樣品的事情了。檢查一下你的樣品最終的buffer成分。

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4樓2013-11-28 00:25:49

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4樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 00:25:49
你的loading buffer應(yīng)該沒有什么問題。樣品的離子強度大對PAGE的影響很大，比方說含有較高濃度的鹽或者磷酸根。如果marker沒有問題，只能是樣品的事情了。檢查一下你的樣品最終的buffer成分。...

里面就是含有較高的nacl，但是分子量太小和鹽分不開，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出來條帶。應(yīng)該是沒有磷酸根的。您有沒有什么好的建議來除鹽呢？

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5樓2013-11-28 13:51:52

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5樓: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 13:51:52
里面就是含有較高的nacl，但是分子量太小和鹽分不開，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出來條帶。應(yīng)該是沒有磷酸根的。您有沒有什么好的建議來除鹽呢？...

可以過脫鹽柱或者透析。

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6樓2013-11-28 17:02:23

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6樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 17:02:23
可以過脫鹽柱或者透析。...

我用100-500的透析袋透析兩個小時鹽沒除掉，但是我的樣品已經(jīng)沒有活性了，我用多肽柱分離純化的，但是沒有和鹽分開。所以我很郁悶，現(xiàn)在跑不出來條帶就很著急，是不是哪個過程我出問題了？

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7樓2013-11-28 21:42:14

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7樓: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-28 21:42:14
我用100-500的透析袋透析兩個小時鹽沒除掉，但是我的樣品已經(jīng)沒有活性了，我用多肽柱分離純化的，但是沒有和鹽分開。所以我很郁悶，現(xiàn)在跑不出來條帶就很著急，是不是哪個過程我出問題了？...

透析除鹽時間長短與透析方式、透析液量的多少有關(guān)。你要的酶活是否要結(jié)合輔助因子？有可能透析時輔助因子掉了。如果你只是為了跑變性電泳，是否有活性問題不大。如果你要活性樣品，可能需要在透析液液中加入輔助因子或者透析完再加入重新結(jié)合。

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8樓2013-11-29 01:26:04

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