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zhuyanran

鐵蟲 (初入文壇)

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[求助] 關(guān)于tricine-sds-page的一些問(wèn)題

我在跑小分子多肽電泳時(shí)，有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)大家給指導(dǎo)一下
（1）在濃縮膠和夾層膠條帶都是壓成一條線的，可是一進(jìn)分離膠就擴(kuò)散的很嚴(yán)重
（2）我的樣品為什么在loading buffer里溶解后loading buffer和樣品分層呢，上樣時(shí)有白色沉淀
（3）現(xiàn)在marker跑的挺好的，可是樣品死活跑不出來(lái)，而且分離膠擴(kuò)散很嚴(yán)重
希望高手指點(diǎn)一二，謝謝啦！

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1樓 2013-11-27 10:03:08

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cicelyzh

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3樓: Originally posted by zhuyanran at 2013-11-27 14:39:32
您好，我用的loading buffer是G-250，我的樣品是微生物的胞外產(chǎn)物，我就用Nacl 離子交換純化和水過(guò)分子篩純化做的，沒(méi)有用什么特殊的試劑，我用的loading buffer是參照2006年的tricine- sds-page來(lái)做的，配方是12 ...

你的loading buffer應(yīng)該沒(méi)有什么問(wèn)題。樣品的離子強(qiáng)度大對(duì)PAGE的影響很大，比方說(shuō)含有較高濃度的鹽或者磷酸根。如果marker沒(méi)有問(wèn)題，只能是樣品的事情了。檢查一下你的樣品最終的buffer成分。

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4樓2013-11-28 00:25:49

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【答案】應(yīng)助回帖

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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-11-27 13:29:50
zhuyanran: 金幣+5, ★有幫助, 希望多多指導(dǎo)，還有很多要請(qǐng)教的，謝謝了！ 2013-11-27 20:40:55

1. 你指溴酚藍(lán)前沿?cái)U(kuò)散嗎？
2. 懷疑你的樣品本身含有一些成分，與SDS發(fā)生沉淀。你的樣品是怎樣提取的，有什么特殊試劑？
3. marker好說(shuō)嘛膠沒(méi)有問(wèn)題。是樣品本身的問(wèn)題。我覺得你樣品制備本身可能用了一些不相容的試劑。

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2樓2013-11-27 12:46:34

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-27 12:46:34
1. 你指溴酚藍(lán)前沿?cái)U(kuò)散嗎？
2. 懷疑你的樣品本身含有一些成分，與SDS發(fā)生沉淀。你的樣品是怎樣提取的，有什么特殊試劑？
3. marker好說(shuō)嘛膠沒(méi)有問(wèn)題。是樣品本身的問(wèn)題。我覺得你樣品制備本身可能用了一些不相容的 ...

您好，我用的loading buffer是G-250，我的樣品是微生物的胞外產(chǎn)物，我就用Nacl 離子交換純化和水過(guò)分子篩純化做的，沒(méi)有用什么特殊的試劑，我用的loading buffer是參照2006年的tricine- sds-page來(lái)做的，配方是12%SDS,6%巰基乙醇，30%甘油，0.05%G-250,150mM Tris-cl， pH 6.8. 不知道這是不是有什么問(wèn)題。在濃縮膠和夾層膠壓縮的特別好，但是一進(jìn)分離膠就擴(kuò)散的很嚴(yán)重。

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3樓2013-11-27 14:39:32

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4樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 00:25:49
你的loading buffer應(yīng)該沒(méi)有什么問(wèn)題。樣品的離子強(qiáng)度大對(duì)PAGE的影響很大，比方說(shuō)含有較高濃度的鹽或者磷酸根。如果marker沒(méi)有問(wèn)題，只能是樣品的事情了。檢查一下你的樣品最終的buffer成分。...

里面就是含有較高的nacl，但是分子量太小和鹽分不開，反正是一溶解就有沉淀，而且也跑不出來(lái)?xiàng)l帶。應(yīng)該是沒(méi)有磷酸根的。您有沒(méi)有什么好的建議來(lái)除鹽呢？

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5樓2013-11-28 13:51:52

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