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ningning915
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[求助]
XhoI和NcoI雙酶切之后連接轉(zhuǎn)化不長(zhǎng)克隆
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| 你們好，我想請(qǐng)教個(gè)問題，我用的載體是pBac5，用NcoI和XhoI37℃進(jìn)行雙酶切（做過3次，2次過夜，一次6h），之后膠回收，目的片段是有酶切位點(diǎn)的退火形成的雙鏈，之后連接，用過載體和目的片段為1:3、1:4、1:5、1:6、1:7.5、3:3、2:3的體系連接，目的片段只有50bp，只長(zhǎng)過一次，之后再也沒長(zhǎng)過克隆是怎么回事呢？？請(qǐng)高手請(qǐng)教，謝謝��！非常的著急�。。� |
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1，做陽性對(duì)照； 2，檢查你的退火后的雙鏈?zhǔn)怯蠴VERHANG的，就如酶切后的一樣； 3，電泳檢查你確實(shí)回收到了酶切后的載體， 4，如果再做酶切可以時(shí)間短一點(diǎn)，一個(gè)小時(shí)就夠了，這樣做克隆也快。 |
5樓2013-11-28 10:07:04
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