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ningning915
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[求助]
XhoI和NcoI雙酶切之后連接轉(zhuǎn)化不長克隆
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| 你們好,我想請教個問題,我用的載體是pBac5,用NcoI和XhoI37℃進(jìn)行雙酶切(做過3次,2次過夜,一次6h),之后膠回收,目的片段是有酶切位點(diǎn)的退火形成的雙鏈,之后連接,用過載體和目的片段為1:3、1:4、1:5、1:6、1:7.5、3:3、2:3的體系連接,目的片段只有50bp,只長過一次,之后再也沒長過克隆是怎么回事呢??請高手請教,謝謝!非常的著急!。 |
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