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windleakey金蟲 (小有名氣)
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[求助]
PGEX-6P-1 載體構(gòu)建 求幫忙
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情況是這樣的，有個老師設(shè)計好的引物給我，讓我克隆表達(dá)一個蛋白。我構(gòu)建好幾個載體準(zhǔn)備開始表達(dá)，回頭看發(fā)現(xiàn)下游引物有點問題。結(jié)果導(dǎo)致克隆進(jìn)載體的目的基因的堿基數(shù)不是3的倍數(shù)，多出了一個堿基。也就是說向下移碼了一位。 想請問大神們，這樣還能做表達(dá)嗎？這關(guān)系到我是繼續(xù)往下做western還是重頭開始。 我用重組PGEX-6P-1質(zhì)粒SDS-PAGE發(fā)現(xiàn)很像蛋白表達(dá)出來了。 我在PGEX-6P-1多克隆位點下游發(fā)現(xiàn)這樣的序列TGA C TGA C TGA，連續(xù)三個終止密碼子，這是不是代表就算移碼也沒關(guān)系，我的蛋白有可能表達(dá)呢？ |
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