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求教解釋下為什么PCR時(shí)提高退火溫度可以提高連接的特異性？
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| 不太懂這個(gè) 做的也好亂 要做的是將一種酶的基因從PET28a中轉(zhuǎn)接到PET32a中，因?yàn)樵谇罢咧斜磉_(dá)出的產(chǎn)物不溶，所以是要換一個(gè)載體。做PCR的時(shí)候我就想直到為什么PCR提高退火溫度就可以提高引物特異性，減少引物二聚體的產(chǎn)生呢？【哎 我只是個(gè)本科生 金幣就這么點(diǎn)了 】 |
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拂曉晨風(fēng)
木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-12-02 00:37:21
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鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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溫度的本質(zhì)就是粒子的活動(dòng)程度 溫度越高 粒子的活動(dòng)能力就越強(qiáng) 自然就不容易被其他粒子束縛 DNA引物和模板的結(jié)合是氫鍵 一種相對較弱的作用力 因此 氫鍵的數(shù)量（配對堿基）的數(shù)量直接決定了這種結(jié)合的穩(wěn)定性 之所以被稱為特異性結(jié)合 就是因?yàn)橐锱c模板間基本可以完美匹配（通用引物也不會差幾個(gè)堿基的） 所以相對非特異性結(jié)合 特異性結(jié)合具有更高的穩(wěn)定性 也就能耐受更高的溫度 |
3樓2013-12-02 09:37:32
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