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371522029金蟲 (正式寫手)
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[交流]
關(guān)于大質(zhì)粒提。ǎ模危撂崛。
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我查詢到一篇文獻(xiàn),里面有幾個(gè)個(gè)步驟, 1.異丙醇沉淀后,沉淀溶解在TE中, 2.用5M氯化鈉混勻,離心上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新管中, 3.再次異丙醇沉淀,離心沉淀溶解在TE中, 4.用9M氯化鋰靜置后離心上清轉(zhuǎn)移到新管中, 5.再次用異丙醇沉淀。 求解釋個(gè)步驟作用,和目的。 |
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biodai質(zhì)粒提取可以參考: 請(qǐng)自備50mL離心管、20mL離心管、異丙醇、70%乙醇 取50mL菌液,置于50mL離心管中,4000rpm 4℃離心5 min,徹底棄除上清。 ↓ 加入20mL溶液A,充分振蕩2min,使菌體充分懸浮,確保無絮塊存在。4000rpm 4℃離心5min,徹底棄除上清。 ↓ 加入2mL溶液I和40μL溶液B,充分振蕩2min,使菌體充分懸浮,確保無絮塊存在。 ↓ 加入4mL溶液II,蓋緊管蓋,輕輕顛倒混勻6次,注意整個(gè)管子的內(nèi)表面均需與溶液II接觸,室溫放置至溶液清亮。(一般為4-5min,如5min后溶液未變清亮,說明細(xì)菌過多,應(yīng)考慮減少菌液量。注意混勻手法要溫和,不要?jiǎng)×一旌希?br /> 加入3mL溶液III,蓋緊管蓋,立即輕輕顛倒混勻8次,4℃放置5min。(此步注意要盡快混勻,但手法要溫和) ↓ 10000rpm 4℃離心15min,小心吸出上清,輕移至新的20mL離心管。(應(yīng)在離心機(jī)自動(dòng)停轉(zhuǎn)后取出離心管,以免沉淀懸。 ↓ 加入6mL異丙醇,充分混勻,室溫放置10min。 ↓ 10000rpm室溫離心15min,小心吸棄上清,將離心管倒置于吸水紙上,吸去殘余的液體。(應(yīng)在離心機(jī)自動(dòng)停轉(zhuǎn)后取出離心管,以免沉淀懸。 ↓ 加入3mL 70%乙醇,溫和震蕩30Sec,10000rpm離心10min,輕輕棄去上清。 ↓ 加入3mL 70%乙醇,溫和震蕩30Sec,10000rpm離心10min,輕輕棄去上清,倒置于干燥的吸水紙上2min。 ↓ 將離心管敞口室溫放置5min,晾干沉淀。 ↓ 加入100μL溶液IV,溫和震蕩2min,使沉淀完全溶解。 |
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