 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3393 | 回復(fù): 7 | ||||
[求助]
EMSA看不見任何帶，求助求助 已有1人參與
|
|
最近在做EMSA,自己以前沒有做過啊，配置了以下試劑， Binding Buffer (store at -20℃) 10mM HEPES, 50 mM KCl, 1mM DTT 0.2mM, 0.05% NP-40, 10% glycerol, pH 7.4 配置非變性聚丙烯酰胺凝膠(以6％濃度為例) 5×TBE 1mL 30％Ac-Bi 2mL 40％Glycerin 625μl DDW 3.125Ml 10%AP 150μl 10%TEMED 100μl 以預(yù)冷為4℃的0.5×TBE為電泳緩沖液，100V預(yù)電泳30-60min 我的DNA是單鏈，5‘FAM標(biāo)記，退火后加入Binding Buffer，細(xì)胞核蛋白孵育1h后加入6×Loading Buffer (TAKARA) 4μl，上樣10－20μl，100V電泳至溴酚藍(lán)于三分之二處。 但是結(jié)果如下圖，沒有條帶，而后我又用不帶標(biāo)記的DNA與蛋白孵育以后進(jìn)行EMSA，然后用EB染膠，發(fā)現(xiàn)DNA都在加樣孔處，且呈現(xiàn)梯度增加（幾個(gè)孔所加DNA含量相等，但是細(xì)胞核蛋白梯度增加）。下圖由右至左：Marker,DNA,細(xì)胞核蛋白，之后的幾個(gè)孔都是DNA+細(xì)胞核蛋白，且細(xì)胞核蛋白濃度增加。 有一個(gè)奇怪的現(xiàn)象就是Marker的孔下方也會(huì)有亮亮的彎曲的條帶，不知道是什么東西？ 哪位大俠看看如何改進(jìn)？萬分感謝��！實(shí)驗(yàn)就差這最后的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了。。。。 dell 2013-12-04 14 時(shí) 44 分.JPG dell 2013-12-04 14 時(shí) 42 分.JPG [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 實(shí)驗(yàn)求助 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有122人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- origin copy page 到 ppt中，然后把圖打開但是看不見圖？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】為啥Pt/c催化劑用XRD看不見Pt的峰值？
已經(jīng)有12人回復(fù)
yang0071
木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 207 (大學(xué)生)
- 金幣: 1573.4
- 散金: 9319
- 紅花: 21
- 帖子: 4041
- 在線: 647.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 50941
- 注冊(cè): 2004-07-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-12-05 07:41:16
3樓2013-12-05 09:36:16
4樓2014-09-17 09:22:12
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2014-11-07 23:06:40
6樓2016-03-20 18:05:51
7樓2016-03-20 18:06:54
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
8樓2021-09-29 21:30:09
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 sageyaya 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+3
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | Zhangbod 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +3 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +11 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 某某某某位 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑[0856] +4 | WayneLim327 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +6 | △小透明* 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二 +3 | z1z2z3879 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑招人！�。� +3 | 山海天嵐 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|