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liming82101920金蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教 SMARTer RACE的幾個問題
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大俠們,最近在看SMARTer RACE的說明書,幾個問題不明白啊,困惑,特來求助: 1. SMATer技術(shù)據(jù)說其SMARTer引物以及CDS引物中都包含了Sif I的酶切位點GGCCXXXXXGGCC,我找了半天怎么沒找到? 2.5‘race中合成了cDNA第一鏈時,在第一鏈的3’端已經(jīng)并入了SMARTer IIA的互補序列,那么在后續(xù)的第二鏈合成中為什么不繼續(xù)使用引導(dǎo)合成,而是使用了包含SMARTer IIA的LongUP引物?然后在得到完整的cDNA雙鏈后的擴增過程中為什么又將LongUP引物又改成了ShortUP?因為我覺得用SMARTer IIA或者繼續(xù)使用LongUP引物與GSP1搭配就能實現(xiàn)目的片段的大量擴增啊?百思不解,請高手們解疑。 |
金蟲 (小有名氣)
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