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yangjingjing木蟲 (正式寫手)
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RetroQ質(zhì)粒不同體系雙酶切，怎么會(huì)出現(xiàn)不同的帶？
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上圖左起Marker，RetroQ質(zhì)粒，20u雙l酶切體系（1ug質(zhì)粒），20ul雙酶切體系（1ug質(zhì)粒），50ul雙酶切體系（5ug）~~~條帶的周圍被我切的，不是傳說中的雜帶， 20ul體系是一孔直接上樣，50ul體系的是分兩孔上樣的。為啥條帶不在同一位置呢？ 下圖左起Marker，RetroQ質(zhì)粒，20u雙l酶切體系（1ug質(zhì)粒），30ul雙酶切體系（1ug質(zhì)粒），50ul雙酶切體系（1ug）（分兩孔），50ul雙酶切體系（3ug）（分兩孔），50ul雙酶切體系（5ug）（分兩孔）~~~~切了5h 我用的酶切位點(diǎn)是BamH1和EcoR1（二者間隔5bp），TAKARA的酶。這個(gè)到底是啥子情況 ��？為啥位置還有差別呢？是沒有酶切完全？ 20,50qie.JPG 2013.12.7R,R20,R30,R50,R50-3,R50-5=5.JPG |
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cicelyzh
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| 你的情況明顯是因?yàn)槊盖胁煌耆蛘呋緵]有切開。從你第一張圖上的質(zhì)粒對(duì)照條帶位置基本與你50μl切5μg持平，說明沒有切開。做酶切建立反應(yīng)體系時(shí)質(zhì)粒的濃度不宜過高，一般是20μl體系里切1μg質(zhì)粒。如果體系建得太濃，質(zhì)粒的體積占總體積的比例會(huì)增加。在抽提質(zhì)粒的過程中往往會(huì)有一些鹽難以除干凈。有些酶對(duì)鹽濃度是比較敏感的。而且質(zhì)粒一般溶解在TE里，EDTA對(duì)酶切反應(yīng)有抑制。用50μl里切5μg質(zhì)粒有些多了，雖然多加酶或者延長(zhǎng)時(shí)間也可以達(dá)到完全切開的效果。 |
2樓2013-12-11 09:24:04
yangjingjing
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3樓2013-12-11 12:42:39
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4樓2013-12-11 13:28:17
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看來是我太貪心了~~可是有個(gè)奇怪的現(xiàn)象哈~我用的是生工的膠回收試劑盒，每次回收的酶切片段只有35ng/UL（30ul洗脫）左右的的濃度，今天都酶切四孔，4ug的，也是39ng/ul（40ul洗脫），這效率也太低了�。�？？ 5樓2013-12-11 23:09:51
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6樓2013-12-12 02:24:07
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7樓2013-12-12 20:19:19
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8樓2013-12-13 00:22:33
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9樓2013-12-13 19:15:36
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10樓2013-12-14 00:48:26
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