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1728559322新蟲 (初入文壇)
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[求助]
包涵體蛋白純化 已有1人參與
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我的蛋白性質(zhì)： 105kDa ,pet17b載體，在N末端有三個(gè)大的疏水區(qū)，C端有一個(gè)連竄的的9肽重復(fù)序列，富含gly和asp。 我處理的過程： 1. 400ml的菌液離心后用30ml pH=7.8,0.5 M NaCl，20 mM 磷酸鹽，在用壓力破碎。 2. 離心取上清，4℃與樹脂雜交1小時(shí)。 3. 將樹脂和樣品加入到柱子中，讓樹脂自然沉淀，并將流出液再次上樣。 4. 上樣完后PH梯度洗脫。依次用binding buffer（ pH7.8 8 M Urea ，20mM Sodium Phosphate ，500 mMNaCl）、pH=7.0 washing buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl)、pH=6.5 washing 、pH=6.0 washing buffer、pH =4.0 elution buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl ) 結(jié)果： 各洗脫液未濃縮，跑膠沒有條帶。濃縮后，各種洗脫液中都有目的條帶。請(qǐng)問這是怎么回事？！有沒有誰經(jīng)常做包涵體純化的，可以發(fā)點(diǎn)相關(guān)的資料嗎？？？我的郵箱：miaomiaoxia1990@163.com 希望大家能給點(diǎn)意見！現(xiàn)在都快被這蛋白整瘋了�。�！ |
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lpzl
木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-12-20 20:18:15
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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3樓2013-12-22 16:12:55
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