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gogoxiaobai

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 有關(guān)離子交換層析的問(wèn)題

我最近在做離子交換層析初步分離純化多肽，開(kāi)始用了Q Sepharose Fast Flow分離，但是梯洗得到的肽組分活性最高只有30%，而上樣峰的活性差不多達(dá)到30%—40%，后來(lái)考慮用SP Sepharose Fast Flow分離純化，但是這個(gè)填料更不適合，梯洗后組分的活性基本沒(méi)有，活性全在上樣峰里，我想請(qǐng)教各位高手，我是該用Q Sepharose Fast Flow繼續(xù)分離純化？還是不用離子交換層析這一步，直接做下一步G-25凝膠脫鹽？

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1樓 2013-12-22 20:50:06

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hsd3521

主管區(qū)長(zhǎng) (知名作家)

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gogoxiaobai(金幣+1): 謝謝參與

一步分離純化得到純品的可能性很小，如果樓主的活性峰和雜質(zhì)峰在離子色譜階段分開(kāi)，那就可以了，即使是穿透峰有活性，但是這不能保證純度，最好還是再加個(gè)分子篩

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2樓2013-12-22 21:19:37

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gogoxiaobai

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引用回帖:

2樓: Originally posted by hsd3521 at 2013-12-22 01:19:37
一步分離純化得到純品的可能性很小，如果樓主的活性峰和雜質(zhì)峰在離子色譜階段分開(kāi)，那就可以了，即使是穿透峰有活性，但是這不能保證純度，最好還是再加個(gè)分子篩

離子交換層析只是我分離純化的第一步，之后還要走G-25，RP-HPLC。但是穿透峰有活性也沒(méi)有用啊，梯洗后得到的組分有活性才可以啊

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3樓2013-12-22 21:22:26

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hsd3521

主管區(qū)長(zhǎng) (知名作家)

引用回帖:

3樓: Originally posted by gogoxiaobai at 2013-12-22 21:22:26
離子交換層析只是我分離純化的第一步，之后還要走G-25，RP-HPLC。但是穿透峰有活性也沒(méi)有用啊，梯洗后得到的組分有活性才可以啊...

對(duì)于這個(gè)問(wèn)題我跟樓主理解不一樣如果是想要得到純品即使穿透峰有活性但是吸附峰沒(méi)有活性也說(shuō)明純化倍率提升了只是可能因?yàn)榈鞍滋匦院吞盍咸匦詻](méi)有很好的結(jié)合好同時(shí)不能有效保證純度所以還需要進(jìn)一步純化及液相驗(yàn)證等

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5樓2013-12-22 21:40:01

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李長(zhǎng)兵

金蟲(chóng) (正式寫手)

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高深問(wèn)題

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6樓2014-01-16 11:31:09

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冼亮淀粉酶

專家顧問(wèn) (知名作家)

★
gogoxiaobai(金幣+1): 謝謝參與

原來(lái)樓主喜歡把樣品叫做上樣峰，把穿透液叫做穿透峰。就我純化酶的經(jīng)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，如果通過(guò)柱層析法來(lái)做，即使穿透液沒(méi)有酶，酶全都被吸附了，再洗脫下來(lái)之后也不能保證沒(méi)有損失，只是損失的幅度大小不同。

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7樓2014-01-25 19:25:51

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簡(jiǎn)單回復(fù)

ohcesc4樓

2013-12-22 21:31 回復(fù)

gogoxiaobai(金幣+1): 謝謝參與

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