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koalading木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
懸浮細(xì)胞MTT法求助 已有7人參與
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我這個(gè)新手最近一直在做脾細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性很不好，就找了一下原因 1、可能是接種密度的問(wèn)題 2、后來(lái)保證了同時(shí)做兩塊板的細(xì)胞相同，可結(jié)果還是不好，又找原因可能是加完MTT后有些結(jié)晶就吸出來(lái)，可是這個(gè)度把握不好，不吸干凈就會(huì)殘留培養(yǎng)基影響吸光度。因?yàn)闂l件有限，沒(méi)有平板離心機(jī)，除了吸出來(lái)還能怎么辦呢？用注射器吸嗎？ 3、網(wǎng)上查了一下，有人說(shuō)懸浮細(xì)胞可以使用三聯(lián)溶解液，這樣就不用吸出來(lái)了，可是我用的96孔板，每個(gè)孔已經(jīng)有100微升懸液和100微升藥物，孔的容積已經(jīng)不夠再加100溶解液了，這時(shí)候怎么辦呢？（前提是藥物體積如果加的太少，誤差也很大，而且不均勻，所以我沒(méi)有選擇只加10微升，而是配成一定濃度后加100或50微升）  求各位大神幫忙解決一下我的困惑，多謝了 |
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yinhl623
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【答案】應(yīng)助回帖
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koalading: 金幣+25, ★★★很有幫助, 不僅對(duì)實(shí)驗(yàn)有幫助，還從心態(tài)上幫助了我，十分感謝 2014-02-20 19:04:01
koalading: 金幣+25, ★★★很有幫助, 不僅對(duì)實(shí)驗(yàn)有幫助，還從心態(tài)上幫助了我，十分感謝 2014-02-20 19:04:01
| MTT實(shí)驗(yàn)本來(lái)準(zhǔn)確度就不高，再說(shuō)你用的是懸浮細(xì)胞，不離心的話很多紫色結(jié)晶物肯定會(huì)隨著細(xì)胞被吸出來(lái)，孔間結(jié)果必然會(huì)很不均一。建議CCK8，沒(méi)必要為老板節(jié)約這么點(diǎn)錢，老板的基金就是為了做實(shí)驗(yàn)用的，早點(diǎn)出成果比節(jié)約那點(diǎn)錢對(duì)老板更有利。假若老板見(jiàn)你長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)做出好的結(jié)果，他不會(huì)考慮到是因?yàn)槟愎?jié)約錢才造成這種局面，只會(huì)覺(jué)得你能力不行，你自己也會(huì)越來(lái)越不自信，以后要買更貴的試劑就更不敢向老板提了，從此就陷入了越來(lái)越被動(dòng)的怪圈。建議在老板有實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)的情況下，盡量用好的試劑。至少，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期不符的時(shí)候，你可以首先排除試劑的原因，從而更容易找到解決的辦法或者發(fā)現(xiàn)新的問(wèn)題。 |
17樓2013-12-28 15:55:32
5樓2013-12-24 13:33:24
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10樓2013-12-25 23:05:37
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11樓2013-12-25 23:13:33
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4樓2013-12-24 12:43:10
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7樓2013-12-25 15:26:10
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9樓2013-12-25 16:22:07
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