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[求助] 關(guān)于酶切位點(diǎn) 已有9人參與

我最近設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，在引物外加了酶切位點(diǎn)GGGCCCTGATG,其中GGGCCC是酶切位點(diǎn)，從GC之間切開(kāi)，ATG是起始密碼子，在ATG之前加了個(gè)TG這會(huì)導(dǎo)致移碼突變么，這會(huì)不會(huì)導(dǎo)致我的蛋白表達(dá)不出來(lái)，求做過(guò)的大神指點(diǎn)指點(diǎn)。

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1樓 2013-12-23 18:14:52

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cicelyzh

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如果你的載體的N端沒(méi)有其他融合表達(dá)標(biāo)簽就不存在移碼問(wèn)題。不過(guò)，最好檢查一下啟動(dòng)子后到目的基因前面是否還有其他ATG。

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10樓2013-12-24 02:07:20

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shui_hanliu

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你都不加保護(hù)堿基的么，這樣壓根就切不開(kāi)連不到載體上去，除非你用T載，另外，只要前面沒(méi)有起始密碼子就一般不會(huì)移碼，要是前面就開(kāi)始翻譯了，那就要三個(gè)一組，ATG必須在一組內(nèi)

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4樓2013-12-23 18:44:55

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秦守成

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秦博

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自認(rèn)為不會(huì)影響。
原因：由于沒(méi)有破壞其它集團(tuán)

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開(kāi)心快樂(lè)過(guò)一生

2樓2013-12-23 18:36:10

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yujitianqing

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接入酶切位點(diǎn)后需要結(jié)合自己載體分析下是否會(huì)移碼……

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3樓2013-12-23 18:42:47

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mjt2007

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thinkerboy: 金幣+2 2013-12-24 13:32:54

ATG 前的堿基不會(huì)參與轉(zhuǎn)錄的，你設(shè)計(jì)的引物沒(méi)問(wèn)題的。好運(yùn)！

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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.

5樓2013-12-23 19:22:57

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liuzhenhai

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新手啊。要保護(hù)堿基啊。這個(gè)你先看看公司的PCR產(chǎn)物直接酶切到設(shè)計(jì)規(guī)律。

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6樓2013-12-23 19:51:48

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liuzhenhai

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這兩個(gè)堿基在ATG之前，不會(huì)影響。你學(xué)過(guò)分子生物學(xué)嗎？不會(huì)學(xué)以致用嗎？

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7樓2013-12-23 19:54:18

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luwei13566

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-01-29 16:13:39

你加的這兩個(gè)堿基是保護(hù)堿基吧，話說(shuō)~~你為什么不在酶切位點(diǎn)左側(cè)加保護(hù)堿基？？不會(huì)是避免引物內(nèi)的頸環(huán)結(jié)構(gòu)吧~，如果不是你加的這兩個(gè)堿基完全沒(méi)必要嘛~~

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大家相互幫助哈

8樓2013-12-24 00:36:13

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zhaolf

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酶切位點(diǎn)前面要加保護(hù)堿基；如果你的ATG前面沒(méi)有載體的ATG, 那么翻譯就沒(méi)問(wèn)題。

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我是胖虎，我是孩子王！

9樓2013-12-24 02:02:23

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