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有關(guān)引物設(shè)計(jì)時(shí)加酶切位點(diǎn)
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請(qǐng)問(wèn)在設(shè)計(jì)引物加酶切位點(diǎn)時(shí)還要加保護(hù)堿基,這個(gè)保護(hù)堿基是位點(diǎn)兩邊都加,還是只加5'端的呢.. 如果酶切位點(diǎn)兩邊都加保護(hù)堿基了..有什么影響沒(méi).. 請(qǐng)各位大俠指教阿..  |
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小白蝦
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2樓2012-06-23 20:47:25
chan_6217911
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【答案】應(yīng)助回帖
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如果PCR產(chǎn)物連接T載體再酶切，就沒(méi)有必要加保護(hù)堿基；如果是PCR產(chǎn)物回收后直接酶切，還是加上保護(hù)堿基的好（因?yàn)楸Ｗo(hù)堿基對(duì)內(nèi)切酶切割DNA有很大影響） 保護(hù)堿基一般都加在5‘端，如果兩端都加的話，將導(dǎo)致目的基因上引入若干個(gè)堿基序列，如果是基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的話，有可能導(dǎo)致下游基因移碼突變。 |
3樓2012-06-23 23:30:46
gywyl1977
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4樓2012-06-24 09:37:58
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5樓2012-06-24 17:02:47
wang26xin
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