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[求助]
有關(guān)引物設(shè)計(jì)時(shí)加酶切位點(diǎn)
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請(qǐng)問在設(shè)計(jì)引物加酶切位點(diǎn)時(shí)還要加保護(hù)堿基,這個(gè)保護(hù)堿基是位點(diǎn)兩邊都加,還是只加5'端的呢.. 如果酶切位點(diǎn)兩邊都加保護(hù)堿基了..有什么影響沒.. 請(qǐng)各位大俠指教阿.. |
木蟲 (小有名氣)

金蟲 (小有名氣)
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如果PCR產(chǎn)物連接T載體再酶切,就沒有必要加保護(hù)堿基;如果是PCR產(chǎn)物回收后直接酶切,還是加上保護(hù)堿基的好(因?yàn)楸Wo(hù)堿基對(duì)內(nèi)切酶切割DNA有很大影響) 保護(hù)堿基一般都加在5‘端,如果兩端都加的話,將導(dǎo)致目的基因上引入若干個(gè)堿基序列,如果是基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的話,有可能導(dǎo)致下游基因移碼突變。 |
木蟲 (正式寫手)
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