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[求助]
ELISA 空白值高
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ELISA分析 采用間接ELISA檢測抗血清效價(jià)。 用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸鹽緩沖液將純化的重組蛋白稀釋為8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶標(biāo)板, 每孔100μL, 4℃包被過夜。次日每孔加入100μL 5%的山羊血清封閉液, 37℃封閉2h后, 用PBST洗滌3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀釋的羊抗血清100μL, 空白對照為兔抗血清稀釋液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗滌3次。再次每孔加入100μL HRP標(biāo)記的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗滌3次。接下來每孔加入100μL TMB顯色液, 37℃避光反應(yīng)15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸終止液。最后, 在酶標(biāo)儀上測450 nm下的OD值。 但是 空白值離奇的高 很不正常 下面是我三次做的，求高手指點(diǎn)一下 紅色部分是空白值 做了三次預(yù)試 求指導(dǎo) 預(yù)試1.png 預(yù)試2.png 預(yù)試3.png |
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2樓2014-01-04 10:54:46
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