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研究生6969金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求細(xì)菌檢測(cè)方法？ 已有2人參與
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| 我在做真菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，以后準(zhǔn)備產(chǎn)業(yè)化，但是經(jīng)常會(huì)被細(xì)菌感染，從而造成損失，請(qǐng)問有什么方法或儀器可以快速檢測(cè)細(xì)菌感染？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
laozuzunzhe: 金幣+5, good！ 2014-01-05 16:17:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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最快的方法就是用顯微鏡觀察，觀察方法如下: 1. 如果您是真菌的液體發(fā)酵，取一點(diǎn)發(fā)酵液直接制備成水浸片(要用載玻片)，蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察，此時(shí)由于水浸片沒有染色，視野的光線應(yīng)該調(diào)節(jié)暗一些，并且要注意用油鏡觀察時(shí)，水浸片的水不能進(jìn)入香柏油中(要看清楚細(xì)菌的形態(tài)，一般需要用油鏡，因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌，呈菌絲狀，與細(xì)菌的常見形態(tài)：球形、桿形、螺旋形(比較少)很好區(qū)分。如果真菌是酵母菌，就一般有出芽生殖，而且比細(xì)菌大(因?yàn)檎婢钦婧宋⑸?，細(xì)菌是原核微生物，雖然細(xì)菌與酵母菌的相似點(diǎn)是都是單細(xì)胞，但是細(xì)菌小很多，通常在40倍的高倍鏡下看不清形態(tài)，但可以在40倍的高倍鏡下看清酵母菌形態(tài)，并且細(xì)菌是裂殖(即二分分裂), 與酵母菌的出芽生殖很好區(qū)分。也可以用0.2%美蘭染色溶液加入發(fā)酵液(1:1)中制成染液浸片后顯微鏡觀察，更容易鑒別。(液體發(fā)酵物，浸片觀察法) 2. 如果是真菌的液體發(fā)酵，也可取一點(diǎn)發(fā)酵液在干凈載玻片上制成染涂片后，用細(xì)菌的單染色法(最快、最簡單的細(xì)菌形態(tài)染色觀察方法)，涂片干燥后于顯微鏡下觀察，要看清楚細(xì)菌的形態(tài)，也一般需要用油鏡。在顯微鏡下的鑒別方法同步驟1所述。要注意固體發(fā)酵后期，如果是霉菌，可能孢子比較多，但是一種霉菌的孢子，形態(tài)比較固定，也容易與污染的細(xì)菌區(qū)別。(液體發(fā)酵物，涂片觀察法) 3.如果是真菌的固體發(fā)酵，取一點(diǎn)發(fā)酵物(有培養(yǎng)基、菌體)，置于少量無菌生理鹽水(0.85%氯化鈉溶液)或無菌蒸餾水中，再按照上述1或/和2的方法鏡檢即可。 。(固體發(fā)酵物，浸片或涂片觀察法) 4. 上述三種方法都是直接用顯微鏡觀察，沒有培養(yǎng)，因?yàn)槟氖亲羁斓姆椒āＨ绻袝r(shí)間，想更清楚地查明是什么類型的細(xì)菌，可以用活菌檢查法：就是取一定體積發(fā)酵液或一定重量固體發(fā)酵物用一定體積無菌生理鹽水按照十倍稀釋法稀釋后，接種到培養(yǎng)細(xì)菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，一般培養(yǎng)24小時(shí)可見菌落在平板上生長(具體長出時(shí)間也隨污染細(xì)菌的生長速度而定)。再挑取不同的單菌落按照步驟1、或1、或2的方法鏡檢，這樣您至少可以培養(yǎng)處污染細(xì)菌，做仔細(xì)研究，但耗時(shí)間長。(液體或固體發(fā)酵物，活菌培養(yǎng)+制片觀察法) 5. 建個(gè)議: 下次提問最好寫明什么類型發(fā)酵，什么形態(tài)真菌，以便應(yīng)助者少寫些字，同時(shí)也使建議更有針對(duì)性。 |
研究生69692樓2014-01-05 14:02:16
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【答案】應(yīng)助回帖
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不好意思，剛才沒有編輯好，按錯(cuò)了鍵，結(jié)果就發(fā)帖了。請(qǐng)以此帖子為準(zhǔn)。 一、最快的方法就是用顯微鏡觀察，觀察方法如下: 1. 如果您是真菌的液體發(fā)酵，取一點(diǎn)發(fā)酵液直接制備成水浸片(要用載玻片)，蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察，此時(shí)由于水浸片沒有染色，視野的光線應(yīng)該調(diào)節(jié)暗一些，并且要注意用油鏡觀察時(shí)，水浸片的水不能進(jìn)入香柏油中(要看清楚細(xì)菌的形態(tài)，一般需要用油鏡，因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌，呈菌絲狀，與細(xì)菌的常見形態(tài)：球形、桿形、螺旋形(比較少)很好區(qū)分。如果真菌是酵母菌，就一般有出芽生殖，而且比細(xì)菌大，因?yàn)檎婢钦婧宋⑸铮?xì)菌是原核微生物。即: 雖然細(xì)菌與酵母菌的相似點(diǎn)是都是單細(xì)胞，但是細(xì)菌小很多，通常在40倍的高倍鏡下看不清形態(tài)，但可以在40倍的高倍鏡下看清酵母菌形態(tài)，并且細(xì)菌是裂殖(即二分分裂), 與酵母菌的出芽生殖很好區(qū)分。也可以用0.2%美蘭染色溶液加入發(fā)酵液(1:1)中制成染液浸片后顯微鏡觀察，更容易鑒別。(液體發(fā)酵物，浸片觀察法) 2. 如果是真菌的液體發(fā)酵，也可取一點(diǎn)發(fā)酵液在干凈載玻片上制成涂片后，用細(xì)菌的簡單染色法(最快、最簡單的細(xì)菌形態(tài)染色觀察方法)，涂片干燥后于顯微鏡下觀察。要看清楚細(xì)菌的形態(tài)，也一般需要用油鏡觀察。在顯微鏡下的鑒別方法同步驟1所述。(液體發(fā)酵物，涂片觀察法) 3.如果是真菌的固體發(fā)酵，取一點(diǎn)發(fā)酵物(有培養(yǎng)基、菌體)，置于少量無菌生理鹽水(0.85%氯化鈉溶液)或無菌蒸餾水中，再按照上述1或/和2的方法鏡檢即可。要注意固體發(fā)酵后期，如果是霉菌，可能孢子比較多，但是一種霉菌的孢子，形態(tài)比較固定，也容易與污染的細(xì)菌區(qū)別。(固體發(fā)酵物，浸片或涂片觀察法) 二、上述三種方法都是直接用顯微鏡觀察，沒有培養(yǎng)，因?yàn)槟氖亲羁斓姆椒�。如果有時(shí)間，想更清楚地查明是什么類型的細(xì)菌，可以用活菌檢查法：就是取一定體積發(fā)酵液或一定重量固體發(fā)酵物用一定體積無菌生理鹽水按照十倍稀釋法稀釋后，接種到培養(yǎng)細(xì)菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，一般培養(yǎng)24小時(shí)可見菌落在平板上生長(具體長出時(shí)間也隨污染細(xì)菌的生長速度而定)。再挑取不同的單菌落按照步驟1、或2、或3的方法鏡檢，這樣您至少可以培養(yǎng)出污染細(xì)菌，確切看到污染細(xì)菌的菌落，還可以進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別，但耗時(shí)間長。(液體或固體發(fā)酵物，活菌培養(yǎng)+制片觀察法) 5. 建個(gè)議: 下次提問請(qǐng)最好寫明什么類型發(fā)酵，什么形態(tài)真菌，以便應(yīng)助者少寫些字，同時(shí)也使建議更有針對(duì)性。 |
3樓2014-01-05 14:26:03
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5樓2014-01-06 21:08:05
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